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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
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zzjzheng

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1楼2012-03-01 19:32:26
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lxj341401

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12楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-03-03 19:59:25:
兄台，你看我这个分析的对不对，我的上样缓冲液里没有加β-巯基乙醇，但是目的蛋白氨基酸序列里含有半胱氨酸，是不是会形成二硫键使目的蛋白没有完全打开，最终导致跑出来的条带偏小？？？

如果是分子间形成二硫键，形成二聚体或多聚体，分子量会偏大；如果是分子内形成二硫键，分子量不变。
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13楼2012-03-03 20:27:57
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
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1949stone(金币+3): 鼓励 2012-03-02 21:27:46
目的蛋白要比预测的小4kD左右（目的条带约55kD）如果SDS-PAGE结果的话也不能说明真的小，SDS-PAGE出来的只是表观分子量，不是真实分子量。如果不符，可以利用质谱、凝胶排阻等确认。
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2楼2012-03-01 19:47:37
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zzjzheng

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3楼2012-03-01 20:52:57
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
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1949stone(金币+1): 鼓励讨论 2012-03-02 21:28:07
zzjzheng(金币+2): 2012-03-03 16:06:23
引用回帖:
3楼: Originally posted by zzjzheng at 2012-03-01 20:52:57:
这个质谱是不是跟分析化合物质谱差不多啊？凝胶排阻需要哪些东西啊？我们这条件有限，以前师兄师姐都不怎么做分子，所以对这方面了解较少……

有点不一样，是飞行质谱。
质谱和凝胶排阻都要蛋白纯化后做，凝胶排阻就是凝胶过滤，需要一些已知分子量的蛋白做为标准。
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4楼2012-03-01 21:07:43
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