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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量 已有13人参与

宿主菌:BL21(DE3)
表达载体:PET-28a
目的蛋白:63KD
IPTG:终浓度为1mM
诱导温度是:37度
转速:200rmp
请大家多多指教,做了好几次都没有见效果。
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dcb005 at 2010-08-02 21:17:21:
楼主做的是最适条件,不表达可能是位置或者基因的问题
建议你看看是不是在上清里,若上清包涵体都没有,考虑一下你的基因有没有信号肽,会不会分泌到胞外
TCA确定胞外再没有,就是基因问题,换表达体系

我查了一下我的基因中有信号肽,分泌到哪我还没有查到,请指教。
10楼2010-08-03 09:43:57
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lxyyzz

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
换个其他的PET载体试试
2楼2010-08-02 13:23:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流u 2010-08-02 17:43:18
降低IPTG浓度和诱导温度,增加诱导时间试下
3楼2010-08-02 14:21:23
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sunyongle1

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流! 2010-08-02 20:52:39
你的温度太高了吧,降低一下试一试?还有转速也降一下
4楼2010-08-02 18:45:51
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