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11wl11

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】急！急！急！ his标签表达的蛋白出问题了，求指导！！！

师兄出国了，留下来构建的工程菌（4种），IPTG诱导表达带his标签的目的蛋白，主要是包涵体表达，我Ni柱纯化，发现没有结果，就用his的单抗做了个western blot，结果如下：

在附上一个考马斯亮蓝的结果：

这里的“上清”和“沉淀”是超声破碎的上清和沉淀。

[ Last edited by 11wl11 on 2010-11-13 at 11:42 ]

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1楼 2010-11-11 18:17:54

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11wl11

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如果是降解，为什么上清中没有降解，沉淀（包涵体）部分降解了？

5楼2010-11-13 11:46:07

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11wl11

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补充说一下，我之后还用没有诱导和空载体质粒菌株做了western blot，结果都是没有检测到有his阳性的蛋白条带。

2楼2010-11-11 19:49:54

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11wl11

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不能沉了~顶起来！

3楼2010-11-12 09:24:31

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11wl11

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要说的有没有可能是降解了，所以才有这么多片段；
还有没有这种可能，稀有密码子的影响，因为目的DNA序列中确实存在稀有密码子。

4楼2010-11-12 17:59:39

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