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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急！急！急！ his标签表达的蛋白出问题了，求指导！！！
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11wl11

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】急！急！急！ his标签表达的蛋白出问题了，求指导！！！

师兄出国了，留下来构建的工程菌（4种），IPTG诱导表达带his标签的目的蛋白，主要是包涵体表达，我Ni柱纯化，发现没有结果，就用his的单抗做了个western blot，结果如下：

在附上一个考马斯亮蓝的结果：

这里的“上清”和“沉淀”是超声破碎的上清和沉淀。

[ Last edited by 11wl11 on 2010-11-13 at 11:42 ]
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1楼 2010-11-11 18:17:54
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若水5886

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
表达结果很好呀，只是包涵体表达，用Ni柱纯化时要先加尿素等让包涵体变性，这样才能把his标签暴露出来和Ni柱结合哦
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8楼2012-02-17 17:03:05
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11wl11

新虫 (初入文坛)
补充说一下，我之后还用没有诱导和空载体质粒菌株做了western blot，结果都是没有检测到有his阳性的蛋白条带。
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2楼2010-11-11 19:49:54
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11wl11

新虫 (初入文坛)
不能沉了~顶起来！
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3楼2010-11-12 09:24:31
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11wl11

新虫 (初入文坛)
要说的有没有可能是降解了，所以才有这么多片段；
还有没有这种可能，稀有密码子的影响，因为目的DNA序列中确实存在稀有密码子。
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4楼2010-11-12 17:59:39
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