应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急！！！！酶切位点切不开
91/1返回列表
查看: 2340  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

由田120516

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】急！！！！酶切位点切不开

我设计一对引物PCR扩增一段基因，并将其连在T载体上。经PCR验证，没有问题，但酶切这段序列时却切不开。
引物：5‘-CTTAGATCTACCAATGCTTAATCAGTGAGG
       5’-CGGAGATCTGGAACCCCTATTTGTTTATTT
AGATCT为BglII酶切位点，就是要从T载体上用引物上的BglII酶切位点把这段序列切下来。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-11 15:53:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:33:57
换用载体上的酶切位点再切切看。
另外，切的时候跑质粒对照了吗？是个什么情况？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-11 16:01:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:34:07
酶切不出来是什么情况，没有片段，多片段还是切不开质粒啊，另T载体是什么载体，最好把图片放上来，这样也好分析啊。你这样说，那只可能是你的内切酶挂了，借一支新的酶和新的buffer来切下看。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-03-11 16:01:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:34:17
沙发的办法是好办法，不管什么t载体，用载体上的酶切位点验证下
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-11 16:02:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
你两条引物都是一个酶切位点。应该可以切开的，但是我怎么感觉你第二条引物有点问题啊，那么多T。
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-11 17:56:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangleisdnu

金虫 (正式写手)
it is better to sequence it, you are not sure if there is some problem in your primer
sometime the mistake is due to primer synthesis
also check your digestion buffer or incubation temperature
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-11 20:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郝钊

金虫 (小有名气)
不知道你验证了几个转化子。
如果确定内切酶和酶切体系配置没有问题的话，可能是PCR产物有问题，酶切位点突变掉了。建议测序验证一下。
赞一下 回复此楼
7楼2011-03-11 20:11:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zdq516122164

新虫 (小有名气)
看看你的酶  过期没
赞一下 回复此楼
8楼2011-03-11 21:12:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
测个序就知道了啊
赞一下 回复此楼
9楼2011-03-11 23:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 由田120516 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +16 基诺咪客 2026-08-17 20/1000 2026-08-20 12:44 by 201120518022
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[基金申请] 言之凿凿，8月21号(明天)放榜 +12 医学老男孩 2026-08-20 14/700 2026-08-20 10:53 by ran2233
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭