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由田120516

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】急!!!!酶切位点切不开

我设计一对引物PCR扩增一段基因,并将其连在T载体上。经PCR验证,没有问题,但酶切这段序列时却切不开。
引物:5‘-CTTAGATCTACCAATGCTTAATCAGTGAGG
       5’-CGGAGATCTGGAACCCCTATTTGTTTATTT
AGATCT为BglII酶切位点,就是要从T载体上用引物上的BglII酶切位点把这段序列切下来。
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)


测个序就知道了啊
9楼2011-03-11 23:50:34
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1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:33:57
换用载体上的酶切位点再切切看。
另外,切的时候跑质粒对照了吗?是个什么情况?
2楼2011-03-11 16:01:03
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yabxxh

木虫 (正式写手)



1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:34:07
酶切不出来是什么情况,没有片段,多片段还是切不开质粒啊,另T载体是什么载体,最好把图片放上来,这样也好分析啊。你这样说,那只可能是你的内切酶挂了,借一支新的酶和新的buffer来切下看。
3楼2011-03-11 16:01:47
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yabxxh

木虫 (正式写手)



1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:34:17
沙发的办法是好办法,不管什么t载体,用载体上的酶切位点验证下
4楼2011-03-11 16:02:45
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