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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~
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nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~ 已有15人参与

不知哪位大侠用过如上所说的两种酶做过双酶切啊  我怎么切不开 分布酶切也不行啊 急的抓狂啦~
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努力做就有结果～
1楼 2010-08-02 15:46:21
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nnsulei

金虫 (正式写手)
实验做的不顺利啊 郁闷中  ~~
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努力做就有结果～
2楼2010-08-02 15:47:27
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被太阳追逐

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+4):新人鼓励 常来 2010-08-02 17:32:05
bamh1和xbal1应该很容易切啊 你是不是图谱搞错了
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3楼2010-08-02 16:37:32
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dcb005

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
BamH A最适温度30
分布试一试
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2010-08-02 21:13:08
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louli

铜虫 (小有名气)
★ ★
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amisking(金币+1):欢迎分享经验！ 2010-08-02 21:39:18
我用他们也切不开，原因是他两的buffer不一样，即使体系各加一半的buffer也不起作用，所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶，害我浪费一个月的时间。
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5楼2010-08-02 21:23:43
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段家一凡

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-02 21:23:43:
我用他们也切不开，原因是他两的buffer不一样，即使体系各加一半的buffer也不起作用，所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶，害我浪费一个月的时间。

为什么一定要同时切，先用一个酶切完全之后，用另一个酶就可以了，完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶，作用温度不一样，但是差异不是太大。
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6楼2010-08-03 00:17:24
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-03 05:52:26
理论上这两种酶的酶切效率都是挺高的啊！

切得是质粒还是片段啊 ？难道被修饰了

如果在质粒上，你可以拿Xba 1 和 BamH 1分别与另外一个能切开的酶分别做双酶切 ，看看是不是酶切位点出问题了！

如果酶切buffer不同的话，你就分两步酶切吧

貌似我以前也同时做过这两种酶的酶切，没有问题的
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-08-03 00:22:43
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louli

铜虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by 段家一凡 at 2010-08-03 00:17:24:

为什么一定要同时切，先用一个酶切完全之后，用另一个酶就可以了，完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶，作用温度不一样，但是差异不是太大。

你说的这种事乙醇沉淀法，关键是用一个切2完后还得洗涤，再切另一个，太麻烦了
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8楼2010-08-03 07:14:12
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段家一凡

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-03 07:14:12:



你说的这种事乙醇沉淀法，关键是用一个切2完后还得洗涤，再切另一个，太麻烦了

现在试剂盒这么便宜，就不要用乙醇沉淀了，用PCR产物回收试剂盒过一下柱子，几分钟就搞定了。麻烦一点没什么，浪费时间就更麻烦了。如果克隆卡在连接这里，那也是讲不过去了。
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9楼2010-08-03 08:45:01
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风荻

金虫 (小有名气)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-10 16:52:52
不要进行分布酶切，中间一步很容易自连。要防止自连就要用去磷酸化酶，很麻烦。这两个在0.5*K里进行双酶切应该可以的。如果切不开可能是的载体有问题。先跑胶看看大小，然后试试PCR，如果都有，就直接送去测序吧！！
好运！！
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10楼2010-08-03 09:26:50
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