24小时热门版块排行榜    

查看: 2646  |  回复: 21

nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~ 已有15人参与

不知哪位大侠用过如上所说的两种酶做过双酶切啊  我怎么切不开 分布酶切也不行啊 急的抓狂啦~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

努力做就有结果~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnsulei

金虫 (正式写手)

实验做的不顺利啊 郁闷中  ~~
努力做就有结果~
2楼2010-08-02 15:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

被太阳追逐

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+4):新人鼓励 常来 2010-08-02 17:32:05
bamh1和xbal1应该很容易切啊 你是不是图谱搞错了
3楼2010-08-02 16:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
BamH A最适温度30
分布试一试
★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2010-08-02 21:13:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎分享经验! 2010-08-02 21:39:18
我用他们也切不开,原因是他两的buffer不一样,即使体系各加一半的buffer也不起作用,所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶,害我浪费一个月的时间。
5楼2010-08-02 21:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-02 21:23:43:
我用他们也切不开,原因是他两的buffer不一样,即使体系各加一半的buffer也不起作用,所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶,害我浪费一个月的时间。

为什么一定要同时切,先用一个酶切完全之后,用另一个酶就可以了,完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶,作用温度不一样,但是差异不是太大。
6楼2010-08-03 00:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-03 05:52:26
理论上这两种酶的酶切效率都是挺高的啊!

切得是质粒还是片段啊 ?难道被修饰了

如果在质粒上,你可以拿Xba 1 和 BamH 1分别与另外一个能切开的酶分别做双酶切 ,看看是不是酶切位点出问题了!

如果酶切buffer不同的话,你就分两步酶切吧

貌似我以前也同时做过这两种酶的酶切,没有问题的
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-08-03 00:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 段家一凡 at 2010-08-03 00:17:24:

为什么一定要同时切,先用一个酶切完全之后,用另一个酶就可以了,完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶,作用温度不一样,但是差异不是太大。

你说的这种事乙醇沉淀法,关键是用一个切2完后还得洗涤,再切另一个,太麻烦了
8楼2010-08-03 07:14:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-03 07:14:12:



你说的这种事乙醇沉淀法,关键是用一个切2完后还得洗涤,再切另一个,太麻烦了

现在试剂盒这么便宜,就不要用乙醇沉淀了,用PCR产物回收试剂盒过一下柱子,几分钟就搞定了。麻烦一点没什么,浪费时间就更麻烦了。如果克隆卡在连接这里,那也是讲不过去了。
9楼2010-08-03 08:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风荻

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-10 16:52:52
不要进行分布酶切,中间一步很容易自连。要防止自连就要用去磷酸化酶,很麻烦。这两个在0.5*K里进行双酶切应该可以的。如果切不开可能是的载体有问题。先跑胶看看大小,然后试试PCR,如果都有,就直接送去测序吧!!
好运!!
10楼2010-08-03 09:26:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nnsulei 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[文学芳草园] 伙伴们,祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 274求调剂 +4 时间点 2026-03-13 4/200 2026-03-15 15:29 by Rambo13
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-15 3/150 2026-03-15 09:12 by JourneyLucky
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 泣血叩求调剂恩,愿以丹心报师恩 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:56 by houyaoxu
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 一志愿江南大学085701环境工程专硕总分287求调剂 +5 18266118446 2026-03-09 5/250 2026-03-11 16:51 by 2020015
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
信息提示
请填处理意见