24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2698  |  回复: 21

nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~ 已有15人参与

不知哪位大侠用过如上所说的两种酶做过双酶切啊  我怎么切不开 分布酶切也不行啊 急的抓狂啦~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

努力做就有结果~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnsulei

金虫 (正式写手)

实验做的不顺利啊 郁闷中  ~~
努力做就有结果~
2楼2010-08-02 15:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

被太阳追逐

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+4):新人鼓励 常来 2010-08-02 17:32:05
bamh1和xbal1应该很容易切啊 你是不是图谱搞错了
3楼2010-08-02 16:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
BamH A最适温度30
分布试一试
★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2010-08-02 21:13:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎分享经验! 2010-08-02 21:39:18
我用他们也切不开,原因是他两的buffer不一样,即使体系各加一半的buffer也不起作用,所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶,害我浪费一个月的时间。
5楼2010-08-02 21:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-02 21:23:43:
我用他们也切不开,原因是他两的buffer不一样,即使体系各加一半的buffer也不起作用,所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶,害我浪费一个月的时间。

为什么一定要同时切,先用一个酶切完全之后,用另一个酶就可以了,完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶,作用温度不一样,但是差异不是太大。
6楼2010-08-03 00:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-03 05:52:26
理论上这两种酶的酶切效率都是挺高的啊!

切得是质粒还是片段啊 ?难道被修饰了

如果在质粒上,你可以拿Xba 1 和 BamH 1分别与另外一个能切开的酶分别做双酶切 ,看看是不是酶切位点出问题了!

如果酶切buffer不同的话,你就分两步酶切吧

貌似我以前也同时做过这两种酶的酶切,没有问题的
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-08-03 00:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 段家一凡 at 2010-08-03 00:17:24:

为什么一定要同时切,先用一个酶切完全之后,用另一个酶就可以了,完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶,作用温度不一样,但是差异不是太大。

你说的这种事乙醇沉淀法,关键是用一个切2完后还得洗涤,再切另一个,太麻烦了
8楼2010-08-03 07:14:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-03 07:14:12:



你说的这种事乙醇沉淀法,关键是用一个切2完后还得洗涤,再切另一个,太麻烦了

现在试剂盒这么便宜,就不要用乙醇沉淀了,用PCR产物回收试剂盒过一下柱子,几分钟就搞定了。麻烦一点没什么,浪费时间就更麻烦了。如果克隆卡在连接这里,那也是讲不过去了。
9楼2010-08-03 08:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风荻

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-10 16:52:52
不要进行分布酶切,中间一步很容易自连。要防止自连就要用去磷酸化酶,很麻烦。这两个在0.5*K里进行双酶切应该可以的。如果切不开可能是的载体有问题。先跑胶看看大小,然后试试PCR,如果都有,就直接送去测序吧!!
好运!!
10楼2010-08-03 09:26:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nnsulei 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿同济大学323分(080500)求调剂 +8 yikeniu 2026-04-01 8/400 2026-04-05 18:15 by cql1109
[考研] 求调剂,一志愿郑州大学材料与化工专硕,英二数二342分,求老师收留 +18 v12abo 2026-04-02 20/1000 2026-04-05 11:37 by a8144223
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 求调剂 +3 电气小神童 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:17 by barlinike
[考研] 323分(计算机视觉和大模型项目)能直接上手 +3 chaoxiicy 2026-04-01 3/150 2026-04-05 00:50 by chongya
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 290求调剂 +7 luoziheng 2026-04-04 7/350 2026-04-04 23:17 by lqwchd
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +5 崔wj 2026-03-31 5/250 2026-04-04 19:45 by 1753564080
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +6 加一一九 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:57 by 聪明的大松鼠
[考研] 调剂 +5 asdasdassda 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:27 by 岸上的一条鱼
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-03 16:46 by wxiongid
[考研] 工科 267求调剂 +5 wanwan00 2026-04-02 7/350 2026-04-03 14:14 by zhangdingwa
[考研] 262求调剂 +6 励志一定发文章 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:54 by linyelide
[考研] 一志愿a区211,085601-307分求调剂 +13 党嘉豪 2026-03-31 26/1300 2026-04-03 08:33 by 495374996
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 293求调剂 +4 珂珂乐 2026-04-02 4/200 2026-04-02 20:10 by 6781022
[考研] 材料化工340求调剂 +5 jhx777 2026-03-30 5/250 2026-04-02 12:45 by smileboy2006
[考研] 环境工程调剂 +9 hyzzzzzzz. 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:20 by salamander`
[考研] 本2一志愿C9-333分,材料科学与工程,求调剂 +9 升升不降 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:01 by 无际的草原
[考研] 279求调剂 +12 j的立方 2026-03-29 12/600 2026-03-30 20:30 by dick_runner
信息提示
请填处理意见