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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~
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bunny0512

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这两个的buffer不一样是正常的,不过一般产品说明书上会有两个酶分别在各种buffer里的酶切完全率,找一个两个酶效率都还不错的buffer双酶切,或者单酶切,回收再单酶切.
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在哪里~在哪里见过你~
11楼2010-08-03 09:36:40
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nnsulei

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-02 21:23:43:
我用他们也切不开，原因是他两的buffer不一样，即使体系各加一半的buffer也不起作用，所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶，害我浪费一个月的时间。

真是这样的话 那就悲哀啦～～
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努力做就有结果～
12楼2010-08-03 09:59:24
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nnsulei

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 风荻 at 2010-08-03 09:26:50:
不要进行分布酶切，中间一步很容易自连。要防止自连就要用去磷酸化酶，很麻烦。这两个在0.5*K里进行双酶切应该可以的。如果切不开可能是的载体有问题。先跑胶看看大小，然后试试PCR，如果都有，就直接送去测序吧！ ...

我的片段在T载体上 ，已经测序了 完全正确。现在就是切不下来
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努力做就有结果～
13楼2010-08-03 10:02:42
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
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最近我也在用这两酶做双酶切，也是切不出来
可能是保护碱基没设好，酶切位点发生改变了
正在用其它的酶切位点进行验证
同时做单酶切试试  
唉 没办法试验试验
不试咋验啊
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14楼2010-08-03 10:06:05
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nnsulei

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ymzfeng at 2010-08-03 10:06:05:
最近我也在用这两酶做双酶切，也是切不出来
可能是保护碱基没设好，酶切位点发生改变了
正在用其它的酶切位点进行验证
同时做单酶切试试  
唉 没办法试验试验
不试咋验啊

深有同感。。。。。我测序过了，酶切位点正常，保护碱基也是根据要求来设的，分布酶切也做了，做后还是选择了换酶切位点重新做。。苦啊。。
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15楼2010-08-07 14:56:52
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠
★
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引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-02 21:23:43:
我用他们也切不开，原因是他两的buffer不一样，即使体系各加一半的buffer也不起作用，所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶，害我浪费一个月的时间。

酶的效率buffer不一样的情况下一般公司都会告诉你用什么样的buffer可以到达最合适的效果，而且XbaI和BamHI都是酶切效率高的酶，没有说的那么夸张啦！哈哈！
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麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起，么有鱼丸粗面。。那，我要鱼丸么有鱼丸那，我要粗面…………么有粗面那，我要鱼丸粗面……………………
16楼2010-08-10 16:14:10
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
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既然分步切也切不开那很可能与XbaI有关系，XbaI容易受甲基化影响，你把质粒转一下JM109或JM110感受态细胞，然后再切应该没什么问题了。
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
17楼2010-08-10 16:19:22
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先做一下单酶切，注意电泳时一定要加质粒对照。
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18楼2010-08-10 18:23:44
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sadc

木虫 (正式写手)
xbaI有GC甲基化影响的，不知道是不是这个原因。
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19楼2010-08-23 18:49:45
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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20楼2016-01-27 21:17:46
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