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金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~ 已有15人参与

不知哪位大侠用过如上所说的两种酶做过双酶切啊我怎么切不开分布酶切也不行啊急的抓狂啦~

努力做就有结果～

1楼 2010-08-02 15:46:21

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木虫 (正式写手)

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Originally posted by louli at 2010-08-02 21:23:43:
我用他们也切不开，原因是他两的buffer不一样，即使体系各加一半的buffer也不起作用，所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶，害我浪费一个月的时间。

为什么一定要同时切，先用一个酶切完全之后，用另一个酶就可以了，完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶，作用温度不一样，但是差异不是太大。

6楼2010-08-03 00:17:24

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木虫 (正式写手)

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Originally posted by louli at 2010-08-03 07:14:12:

你说的这种事乙醇沉淀法，关键是用一个切2完后还得洗涤，再切另一个，太麻烦了

现在试剂盒这么便宜，就不要用乙醇沉淀了，用PCR产物回收试剂盒过一下柱子，几分钟就搞定了。麻烦一点没什么，浪费时间就更麻烦了。如果克隆卡在连接这里，那也是讲不过去了。

9楼2010-08-03 08:45:01

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