应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~
221/3返回列表123下一页
查看: 2648  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大家有没有用过Xba 1 和 BamH 1我怎么切不开啊~~急~ 已有15人参与

不知哪位大侠用过如上所说的两种酶做过双酶切啊  我怎么切不开 分布酶切也不行啊 急的抓狂啦~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力做就有结果～
1楼 2010-08-02 15:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnsulei

金虫 (正式写手)
实验做的不顺利啊 郁闷中  ~~
赞一下 回复此楼
努力做就有结果～
2楼2010-08-02 15:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

被太阳追逐

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+4):新人鼓励 常来 2010-08-02 17:32:05
bamh1和xbal1应该很容易切啊 你是不是图谱搞错了
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-08-02 16:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
BamH A最适温度30
分布试一试
赞一下(1人) 回复此楼
★穷则独善其身,达则兼济天下★
4楼2010-08-02 21:13:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎分享经验！ 2010-08-02 21:39:18
我用他们也切不开，原因是他两的buffer不一样，即使体系各加一半的buffer也不起作用，所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶，害我浪费一个月的时间。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-08-02 21:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-02 21:23:43:
我用他们也切不开，原因是他两的buffer不一样，即使体系各加一半的buffer也不起作用，所以换酶切位点吧。我就是用这两个酶，害我浪费一个月的时间。

为什么一定要同时切，先用一个酶切完全之后，用另一个酶就可以了，完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶，作用温度不一样，但是差异不是太大。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-08-03 00:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-03 05:52:26
理论上这两种酶的酶切效率都是挺高的啊！

切得是质粒还是片段啊 ？难道被修饰了

如果在质粒上，你可以拿Xba 1 和 BamH 1分别与另外一个能切开的酶分别做双酶切 ，看看是不是酶切位点出问题了！

如果酶切buffer不同的话，你就分两步酶切吧

貌似我以前也同时做过这两种酶的酶切，没有问题的
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
7楼2010-08-03 00:22:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

louli

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 段家一凡 at 2010-08-03 00:17:24:

为什么一定要同时切，先用一个酶切完全之后，用另一个酶就可以了，完全都切好也是很难得。但最少要保证第一个酶切完全。BamHI不同公司的酶，作用温度不一样，但是差异不是太大。

你说的这种事乙醇沉淀法，关键是用一个切2完后还得洗涤，再切另一个，太麻烦了
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-08-03 07:14:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by louli at 2010-08-03 07:14:12:



你说的这种事乙醇沉淀法，关键是用一个切2完后还得洗涤，再切另一个，太麻烦了

现在试剂盒这么便宜，就不要用乙醇沉淀了，用PCR产物回收试剂盒过一下柱子，几分钟就搞定了。麻烦一点没什么，浪费时间就更麻烦了。如果克隆卡在连接这里，那也是讲不过去了。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-08-03 08:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风荻

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-10 16:52:52
不要进行分布酶切，中间一步很容易自连。要防止自连就要用去磷酸化酶，很麻烦。这两个在0.5*K里进行双酶切应该可以的。如果切不开可能是的载体有问题。先跑胶看看大小，然后试试PCR，如果都有，就直接送去测序吧！！
好运！！
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2010-08-03 09:26:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nnsulei 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[考研] 286求调剂 +3 lemonzzn 2026-03-16 5/250 2026-03-16 20:43 by lemonzzn
[考研] 302求调剂 +3 小贾同学123 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:39 by zhq0425
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-15 6/300 2026-03-16 08:00 by wang_dand
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 Dizzy123@ 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:02 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭