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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】急！！！！酶切位点切不开
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由田120516

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】急！！！！酶切位点切不开

我设计一对引物PCR扩增一段基因，并将其连在T载体上。经PCR验证，没有问题，但酶切这段序列时却切不开。
引物：5‘-CTTAGATCTACCAATGCTTAATCAGTGAGG
       5’-CGGAGATCTGGAACCCCTATTTGTTTATTT
AGATCT为BglII酶切位点，就是要从T载体上用引物上的BglII酶切位点把这段序列切下来。
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1楼 2011-03-11 15:53:22
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郝钊

金虫 (小有名气)
不知道你验证了几个转化子。
如果确定内切酶和酶切体系配置没有问题的话，可能是PCR产物有问题，酶切位点突变掉了。建议测序验证一下。
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7楼2011-03-11 20:11:17
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:33:57
换用载体上的酶切位点再切切看。
另外，切的时候跑质粒对照了吗？是个什么情况？
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2楼2011-03-11 16:01:03
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:34:07
酶切不出来是什么情况，没有片段，多片段还是切不开质粒啊，另T载体是什么载体，最好把图片放上来，这样也好分析啊。你这样说，那只可能是你的内切酶挂了，借一支新的酶和新的buffer来切下看。
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3楼2011-03-11 16:01:47
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-03-11 17:34:17
沙发的办法是好办法，不管什么t载体，用载体上的酶切位点验证下
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4楼2011-03-11 16:02:45
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