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由田120516

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】急！！！！酶切位点切不开

我设计一对引物PCR扩增一段基因，并将其连在T载体上。经PCR验证，没有问题，但酶切这段序列时却切不开。
引物：5‘-CTTAGATCTACCAATGCTTAATCAGTGAGG
5’-CGGAGATCTGGAACCCCTATTTGTTTATTT
AGATCT为BglII酶切位点，就是要从T载体上用引物上的BglII酶切位点把这段序列切下来。

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1楼 2011-03-11 15:53:22

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wangleisdnu

金虫 (正式写手)

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it is better to sequence it, you are not sure if there is some problem in your primer
sometime the mistake is due to primer synthesis
also check your digestion buffer or incubation temperature

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