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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆，谁能帮帮我。。。
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紫色云梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因克隆，谁能帮帮我。。。 已有8人参与

最近被实验搞得头都大了，导师让做MHC基因克隆，现在还在中间目的片段的扩增阶段，设计了很多引物，中间只有偶尔一两次扩增出条带，以后再也扩增不出来，我都要疯掉了。有没有做克隆的大哥大姐，帮我分析一下原因到底可能出在哪里呢？还有我的分子基础薄弱，关于克隆基因的一些好的建议希望大家不吝指教，拜谢了。
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1楼 2011-04-12 13:11:31
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紫色云梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yj-lzx at 2011-04-13 09:58:50:
你扩的是什么物种的啊~~~
稀有的么~~~

普通的棘胸蛙，呵呵。
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7楼2011-04-13 13:26:18
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 同意 2011-04-12 17:02:11
引用回帖:
Originally posted by 紫色云梦 at 2011-04-12 13:11:31:
最近被实验搞得头都大了，导师让做MHC基因克隆，现在还在中间目的片段的扩增阶段，设计了很多引物，中间只有偶尔一两次扩增出条带，以后再也扩增不出来，我都要疯掉了。有没有做克隆的大哥大姐，帮我分析一下原因 ...

你能把问题问的更详细点吗？
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-04-12 13:53:49
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475502411

铜虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-12 17:01:35
你先查文献看看那有没有相同引物的外文，可以引用一下，如果能扩出目的基因，再在此引物基础上家酶切位点就行了。保护碱基可以不加，根据你的引物GC含量而定
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可以朝九晚五，也能浪迹天涯
3楼2011-04-12 15:32:46
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
1949stone(EPI+1): 鼓励 2011-04-12 17:00:51
其实对于你这个MHC基因克隆我不太懂。。。
不过要克隆一个基因首先要知道这个基因的全序列，然后找个软件来设计引物（我们用英杰的NTI），设计引物我想你在板块里可以找到很多帖子是关于如何设计引物的，这里就不赘述了；设计好引物之后交由公司合成，回来直接PCR，就OK了！

不过PCR之前最好先根据引物合成报告单知道Tm值，P的时候设置一个温度梯度，看看哪个温度下P出来的条带最亮。然后就选用那个温度大批量进行扩增。。。。

不知道你清楚我说的嘛？

如果哪里不懂PM我！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-12 16:49:51
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