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紫色云梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因克隆,谁能帮帮我。。。已有8人参与

最近被实验搞得头都大了,导师让做MHC基因克隆,现在还在中间目的片段的扩增阶段,设计了很多引物,中间只有偶尔一两次扩增出条带,以后再也扩增不出来,我都要疯掉了。有没有做克隆的大哥大姐,帮我分析一下原因到底可能出在哪里呢?还有我的分子基础薄弱,关于克隆基因的一些好的建议希望大家不吝指教,拜谢了。
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

1949stone(EPI+1): 鼓励 2011-04-12 17:00:51
其实对于你这个MHC基因克隆我不太懂。。。
不过要克隆一个基因首先要知道这个基因的全序列,然后找个软件来设计引物(我们用英杰的NTI),设计引物我想你在板块里可以找到很多帖子是关于如何设计引物的,这里就不赘述了;设计好引物之后交由公司合成,回来直接PCR,就OK了!

不过PCR之前最好先根据引物合成报告单知道Tm值,P的时候设置一个温度梯度,看看哪个温度下P出来的条带最亮。然后就选用那个温度大批量进行扩增。。。。

不知道你清楚我说的嘛?

如果哪里不懂PM我!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-12 16:49:51
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