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xmc201103

铜虫 (初入文坛)

[求助] sacB基因验证出问题了 大家懂的帮帮忙啊 已有2人参与

我是小硕,弱弱的问一下:我有个带sacB基因的载体,是从别的实验室要来的,需要验证sacB的功能,理论上空载体应该是蔗糖致死的,只有插入片段后才能长菌。我把人家寄来的空载体的菌液用LB摇起来,然后涂在含抗生素和5%蔗糖的LB板上,结果全是菌。不知道哪有问题,是不是摇菌的时候也要加蔗糖?还是原本的菌液有问题?很着急呀,希望大家帮帮我~谢谢了!
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

人家的菌寄来后你有没有划单克隆?万一不纯或者在寄的过程中出问题怎么办!
真相是最大的奢侈品
2楼2011-09-14 11:20:27
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xmc201103

铜虫 (初入文坛)

没挑单克隆,这个实验比较急,所以就直接沾了一下人家的菌液在LBK里,就摇了。
3楼2011-09-14 17:36:29
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xmc201103

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-14 11:20:27:
人家的菌寄来后你有没有划单克隆?万一不纯或者在寄的过程中出问题怎么办!

没挑单克隆,这个实验比较急,所以就直接沾了一下人家的菌液在LBK里,就摇了。
4楼2011-09-14 17:37:52
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jinying1123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也出现了这样的问题,我的是把原来的质粒双酶切转化,构建的新质粒,但是我这个新质粒在5%蔗糖的平板上生长了,新质粒多酶切验证,片段大小都正确,但是就是这个sacB没表现出功能,你后来是怎么解决的?我是菌悬液涂板的,不是点中,和这个有关系么
5楼2014-09-12 09:01:51
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凤丫头1988

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

先PCR验证一下菌里面有没有sacB基因,蔗糖浓度可能有点低,可以提高到10%、15%
最小的事情也要尽力
6楼2014-09-12 12:01:56
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