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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » sacB基因验证出问题了 大家懂的帮帮忙啊
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xmc201103

铜虫 (初入文坛)

[求助] sacB基因验证出问题了 大家懂的帮帮忙啊 已有2人参与

我是小硕，弱弱的问一下：我有个带sacB基因的载体，是从别的实验室要来的，需要验证sacB的功能，理论上空载体应该是蔗糖致死的，只有插入片段后才能长菌。我把人家寄来的空载体的菌液用LB摇起来，然后涂在含抗生素和5%蔗糖的LB板上，结果全是菌。不知道哪有问题，是不是摇菌的时候也要加蔗糖？还是原本的菌液有问题？很着急呀，希望大家帮帮我~谢谢了！
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1楼 2011-09-14 10:03:26
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

人家的菌寄来后你有没有划单克隆？万一不纯或者在寄的过程中出问题怎么办！
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真相是最大的奢侈品
2楼2011-09-14 11:20:27
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xmc201103

铜虫 (初入文坛)
没挑单克隆，这个实验比较急，所以就直接沾了一下人家的菌液在LBK里，就摇了。
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3楼2011-09-14 17:36:29
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xmc201103

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-14 11:20:27:
人家的菌寄来后你有没有划单克隆？万一不纯或者在寄的过程中出问题怎么办！

没挑单克隆，这个实验比较急，所以就直接沾了一下人家的菌液在LBK里，就摇了。
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4楼2011-09-14 17:37:52
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jinying1123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也出现了这样的问题，我的是把原来的质粒双酶切转化，构建的新质粒，但是我这个新质粒在5%蔗糖的平板上生长了，新质粒多酶切验证，片段大小都正确，但是就是这个sacB没表现出功能，你后来是怎么解决的？我是菌悬液涂板的，不是点中，和这个有关系么
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5楼2014-09-12 09:01:51
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凤丫头1988

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

先PCR验证一下菌里面有没有sacB基因，蔗糖浓度可能有点低，可以提高到10%、15%
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最小的事情也要尽力
6楼2014-09-12 12:01:56
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