应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因克隆，谁能帮帮我。。。
91/1返回列表
查看: 1731  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

紫色云梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】基因克隆，谁能帮帮我。。。 已有8人参与

最近被实验搞得头都大了，导师让做MHC基因克隆，现在还在中间目的片段的扩增阶段，设计了很多引物，中间只有偶尔一两次扩增出条带，以后再也扩增不出来，我都要疯掉了。有没有做克隆的大哥大姐，帮我分析一下原因到底可能出在哪里呢？还有我的分子基础薄弱，关于克隆基因的一些好的建议希望大家不吝指教，拜谢了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-12 13:11:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 同意 2011-04-12 17:02:11
引用回帖:
Originally posted by 紫色云梦 at 2011-04-12 13:11:31:
最近被实验搞得头都大了，导师让做MHC基因克隆，现在还在中间目的片段的扩增阶段，设计了很多引物，中间只有偶尔一两次扩增出条带，以后再也扩增不出来，我都要疯掉了。有没有做克隆的大哥大姐，帮我分析一下原因 ...

你能把问题问的更详细点吗？
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-04-12 13:53:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-12 17:01:35
你先查文献看看那有没有相同引物的外文，可以引用一下，如果能扩出目的基因，再在此引物基础上家酶切位点就行了。保护碱基可以不加，根据你的引物GC含量而定
赞一下(2人) 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
3楼2011-04-12 15:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
1949stone(EPI+1): 鼓励 2011-04-12 17:00:51
其实对于你这个MHC基因克隆我不太懂。。。
不过要克隆一个基因首先要知道这个基因的全序列，然后找个软件来设计引物（我们用英杰的NTI），设计引物我想你在板块里可以找到很多帖子是关于如何设计引物的，这里就不赘述了；设计好引物之后交由公司合成，回来直接PCR，就OK了！

不过PCR之前最好先根据引物合成报告单知道Tm值，P的时候设置一个温度梯度，看看哪个温度下P出来的条带最亮。然后就选用那个温度大批量进行扩增。。。。

不知道你清楚我说的嘛？

如果哪里不懂PM我！
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-12 16:49:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meizishu

禁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 鼓励 2011-04-12 17:01:45
本帖内容被屏蔽
5楼2011-04-12 16:56:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yj-lzx

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫生化熊

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你扩的是什么物种的啊~~~
稀有的么~~~
赞一下(1人) 回复此楼
曾经的你/以为只要带着那把青春的长剑和赤子的良心就可以说服自己不出卖理想的灵魂/在最寂寞和不得不流泪的晚上/即使连自己都在笑自己傻/依然拔出怀中的长剑~~~
6楼2011-04-13 09:58:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

紫色云梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yj-lzx at 2011-04-13 09:58:50:
你扩的是什么物种的啊~~~
稀有的么~~~

普通的棘胸蛙，呵呵。
赞一下 回复此楼
7楼2011-04-13 13:26:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emilyding

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是不是克隆片段太大了啊，或者可以选择低保真的Taq酶试试
赞一下(1人) 回复此楼
好好科研，好好生活！
8楼2011-04-13 13:39:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyidao

金虫 (小有名气)
SO EASY!
回复此楼
9楼2011-04-13 13:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 紫色云梦 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305分求调剂（食品工程） +3 Sxy112 2026-03-21 5/250 2026-03-22 11:35 by 杨杨杨紫
[考研] 求调剂院校信息 +5 CX 330 2026-03-21 5/250 2026-03-22 11:32 by 杨杨杨紫
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +6 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-21 17:21 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 289求调剂 +6 怀瑾握瑜l 2026-03-20 6/300 2026-03-20 20:30 by 学员8dgXkO
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭