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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案
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feitianrenwo

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案 已有10人参与

求助基因克隆方面的问题解决方案

本人正在克隆一个微生物的一个基因，设计简并引物扩增基因组DNA，获得了几个DNA片段，在NCBI里比对，与一些微生物的同源性达到80%以上，我想知道有了这些DNA片段的序列，如何知道相应的氨基酸序列呢？然后如何得到该基因的全长？（已经知道没有内含子）
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1楼 2010-05-14 18:11:36
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-14 21:16:19
feitianrenwo(金币+3): 2010-05-15 09:44:05
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-16 09:44:38
有了DNA序列如何知道相应的aa氨基酸序列？翻译啊，无论是什么序列，只要是功能基因，那么只有一个阅读框是正确的，你可以正向反向翻译，去掉一个碱基再翻译，去掉两个碱基再翻译，在翻译中不中断的序列即是正确的阅读框，拿翻译的结果去做蛋白质blast
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2楼2010-05-14 19:57:24
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gastrodia

金虫 (正式写手)
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-15 11:08:35
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-15 11:11:11
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-16 09:44:25
得到部分序列如何获得全长，从cDNA着手就是RACE，从DNA着手可以genomic walking或者反向PCR
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6楼2010-05-15 10:59:30
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gastrodia

金虫 (正式写手)
feitianrenwo(金币+1): 2010-05-16 09:44:19
8KB基因很难一次PCR成功的，你慢慢搞吧，没有内含子的基因有8K，很大的蛋白质啊，2666个氨基酸
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8楼2010-05-15 19:18:20
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