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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】加急~~~求助：关于基因克隆与表达引物设计的问题！希望高人指点！
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小榨123

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】加急~~~求助：关于基因克隆与表达引物设计的问题！希望高人指点！ 已有2人参与

各位高人，希望得到大家的帮助！
今天看了一天的文献，还是没明白该怎么去设计引物。
我要做基因克隆和表达。

我有下面几个问题，希望大家能帮忙。

（1）有的引物是根据mRNA序列设计的，而有的是根据cDNA序列设计的。我想知道这两个在primer 5.0这个软件上设计的时候有什么区别吗？哪样设计会更容易？

（2）我要做克隆和表达，有几篇文献是克隆和表达的引物是分开设计的，还有的是共用同一种引物。这个该怎么选择？

（3）他们在上游和下游引物上直接加入酶切位点，这个是随便加的还是有什么原则啊？该怎么去设计才能让我的克隆和表达用同一对引物？


急！！
希望好心人帮帮忙
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1楼 2010-10-30 19:51:55
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wxf8470

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):鼓励交流 2010-11-02 12:35:33
首先根据表达载体和目的基因序列选择酶的种类。如果目的基因不便于直接连接到表达载体上，需要通过中间载体，也叫克隆载体。因为目的基因的阅读框是固定的，所以引物的启始位置已定，primer 5.0 可不用。在酶切位点前加3个碱基的保护碱基即可。
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2楼2010-10-30 22:47:15
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小榨123

银虫 (小有名气)
谢谢你啊。非常感谢。还有个我所选的基因mRNA序列只有一个CDS区，是不就这样直接设计就好啊？不需要别的什么。
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3楼2010-11-02 09:51:46
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wxf8470

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-11-02 23:37:16
包括启始和终止密码就完整了。如果带标签，标签在5端则目的基因不带ATG, 在3端则目的基因
不带终止密码
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4楼2010-11-02 22:58:47
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