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小榨123

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】加急~~~求助:关于基因克隆与表达引物设计的问题!希望高人指点! 已有2人参与

各位高人,希望得到大家的帮助!
今天看了一天的文献,还是没明白该怎么去设计引物。
我要做基因克隆和表达。

我有下面几个问题,希望大家能帮忙。

(1)有的引物是根据mRNA序列设计的,而有的是根据cDNA序列设计的。我想知道这两个在primer 5.0这个软件上设计的时候有什么区别吗?哪样设计会更容易?

(2)我要做克隆和表达,有几篇文献是克隆和表达的引物是分开设计的,还有的是共用同一种引物。这个该怎么选择?

(3)他们在上游和下游引物上直接加入酶切位点,这个是随便加的还是有什么原则啊?该怎么去设计才能让我的克隆和表达用同一对引物?


急!!
希望好心人帮帮忙
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wxf8470

木虫 (小有名气)

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silicare(金币+1):鼓励交流 2010-11-02 12:35:33
首先根据表达载体和目的基因序列选择酶的种类。如果目的基因不便于直接连接到表达载体上,需要通过中间载体,也叫克隆载体。因为目的基因的阅读框是固定的,所以引物的启始位置已定,primer 5.0 可不用。在酶切位点前加3个碱基的保护碱基即可。
2楼2010-10-30 22:47:15
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小榨123

银虫 (小有名气)

谢谢你啊。非常感谢。还有个我所选的基因mRNA序列只有一个CDS区,是不就这样直接设计就好啊?不需要别的什么。
3楼2010-11-02 09:51:46
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wxf8470

木虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-11-02 23:37:16
包括启始和终止密码就完整了。如果带标签,标签在5端则目的基因不带ATG, 在3端则目的基因
不带终止密码
4楼2010-11-02 22:58:47
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