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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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suixing1956

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助全基因合成

打算找公司合成一段1100个碱基的DNA序列,有启动子和终止子。想要在序列两端引入Bind HI和XhoI,该如何设计?是直接在序列两端引入酶切位点吗?恳请赐教!
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-01 08:17:56
你如果是用来表达的,就不需要启动子和终止子了。想要在序列两端引入Bind HI和XhoI,就直接在两端加酶切位点就是,不需要什么特别的设计,只需要分析下你的目的基因中有没有这两个酶切位点,免得后面酶切时把目的基因也切断了,然后委托合成,合成现在也便宜的,三块多/bp。
2楼2011-07-31 21:39:35
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 一并奖励 2011-08-01 08:19:32
suixing1956(金币+2): 了解了,非常感谢。 2011-08-01 08:47:10
2楼的牛人说的不错滴~我补充一下,嘿嘿
我在生工合成,3块钱1个碱基。合成完了才听说捷瑞2块7一个碱基,
1,二楼说的很有道理,如果是pET载体表达的话,可以没有起始终止密码子,但是必须注意加酶切位点有没有移码突变。还有一种情况是载体本身没有起始密码子的表达载体,这时需要加上的。
2,直接在设计基因两端加酶切序列。这个生工的服务还是可以的,开始合成基因的时候,我没有加起始终止密码子和酶切位点的,打算合成一些带酶切位点和起始终止密码子的引物,PCR后切胶回收~生工的孔繁静(Refuse AD,人确实很耐心)提示我是不是加上酶切位点和起始终止密码子,到时候直接提质粒酶切就可以了~~考虑虽然加上十几个碱基贵点,但是后面操作省了很多,值了,如果后面免不了用特异性引物PCR验证,也可以用引物的方式加进去酶切位点序列和起始终止密码子,引物合成有公司一块钱一个碱基,提供4OD的量,哈哈,竞争吧,呵呵。
3,值得提醒的是,合成基因做表达的话,基因序列可以免费到公司做密码子优化设计的。优化后,看看基因内部有没有酶切位点,这个有木有基因合成公司会提醒你的。
4,合成时间,很快,我的10天左右就可以拿到3条基因~
3楼2011-07-31 22:24:08
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 热心哈 2011-08-01 17:03:00
起始终止子......表达载体一般都有的,嘿嘿。特此更正。
如果楼主要做pMD、pUC等克隆载体的表达,必须加上启动子终止子和SD序列。。。我做过pMD 18 T Vector的表达,还可以的~
起始终止密码子、酶切位点设计没有什么特殊要求
合成1bp 3块钱,不是一碱基

有问题可以“引用回复”或站内信通知我。
4楼2011-08-01 00:35:45
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duke01361

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 最近很活跃,热心鼓励之 2011-08-02 08:08:47
本来我可以帮你设计,怎奈我在国外,在这里没法帮您!
观音菩萨信徒myblog:http://blog.sciencenet.cn/u/duke01361
5楼2011-08-01 07:48:23
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江苏虞游

木虫 (正式写手)

可以找找上海生工,很不错的一家公司
6楼2011-08-01 12:39:45
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cyzhgt

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gwbk at 2011-07-31 22:24:08:
2楼的牛人说的不错滴~我补充一下,嘿嘿
我在生工合成,3块钱1个碱基。合成完了才听说捷瑞2块7一个碱基,
1,二楼说的很有道理,如果是pET载体表达的话,可以没有起始终止密码子,但是必须注意加酶切位点 ...

为什么我在生工合成基因要每对碱基3.8块呢??难道我被坑了???求回复!!
7楼2011-08-01 16:35:32
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gwbk

木虫 (正式写手)

是有这种情况的,你没有讲价吗?跟合成数量也有关系的。
8楼2011-08-01 16:51:39
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-02 08:09:08
引用回帖:
7楼: Originally posted by cyzhgt at 2011-08-01 16:35:32:
为什么我在生工合成基因要每对碱基3.8块呢??难道我被坑了???求回复!!

价格都是可以商量的,你可以跟他们讨价还价,态度强硬些!我们实验室是先付了1万块在他们那里,这样子他们给的价格就会低些。
9楼2011-08-01 17:04:52
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cyzhgt

金虫 (小有名气)

哦  谢谢啊!!不过我合的不是很多,今年合过两次,都是一百多个碱基~~ 下次要跟他们讲价才行  哈哈!!
10楼2011-08-01 23:19:38
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