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suixing1956

新虫 (初入文坛)

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专业: 生物化学

[求助] 求助全基因合成

打算找公司合成一段1100个碱基的DNA序列，有启动子和终止子。想要在序列两端引入Bind HI和XhoI，该如何设计？是直接在序列两端引入酶切位点吗？恳请赐教！

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1楼2011-07-31 16:51:47

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

MolEPI: 58
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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-08-01 08:17:56

你如果是用来表达的，就不需要启动子和终止子了。想要在序列两端引入Bind HI和XhoI，就直接在两端加酶切位点就是，不需要什么特别的设计，只需要分析下你的目的基因中有没有这两个酶切位点，免得后面酶切时把目的基因也切断了，然后委托合成，合成现在也便宜的，三块多/bp。

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2楼2011-07-31 21:39:35

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gwbk

木虫 (正式写手)

MolEPI: 54
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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 一并奖励 2011-08-01 08:19:32
suixing1956(金币+2): 了解了，非常感谢。 2011-08-01 08:47:10

2楼的牛人说的不错滴~我补充一下，嘿嘿
我在生工合成，3块钱1个碱基。合成完了才听说捷瑞2块7一个碱基，

。
1，二楼说的很有道理，如果是pET载体表达的话，可以没有起始终止密码子，但是必须注意加酶切位点有没有移码突变。还有一种情况是载体本身没有起始密码子的表达载体，这时需要加上的。
2，直接在设计基因两端加酶切序列。这个生工的服务还是可以的，开始合成基因的时候，我没有加起始终止密码子和酶切位点的，打算合成一些带酶切位点和起始终止密码子的引物，PCR后切胶回收~生工的孔繁静（Refuse AD，人确实很耐心）提示我是不是加上酶切位点和起始终止密码子，到时候直接提质粒酶切就可以了~~考虑虽然加上十几个碱基贵点，但是后面操作省了很多，值了，如果后面免不了用特异性引物PCR验证，也可以用引物的方式加进去酶切位点序列和起始终止密码子，引物合成有公司一块钱一个碱基，提供4OD的量，哈哈，竞争吧，呵呵。
3，值得提醒的是，合成基因做表达的话，基因序列可以免费到公司做密码子优化设计的。优化后，看看基因内部有没有酶切位点，这个有木有基因合成公司会提醒你的。
4，合成时间，很快，我的10天左右就可以拿到3条基因~

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3楼2011-07-31 22:24:08

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