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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 一并奖励 2011-08-01 08:19:32
suixing1956(金币+2): 了解了,非常感谢。 2011-08-01 08:47:10
2楼的牛人说的不错滴~我补充一下,嘿嘿
我在生工合成,3块钱1个碱基。合成完了才听说捷瑞2块7一个碱基,
1,二楼说的很有道理,如果是pET载体表达的话,可以没有起始终止密码子,但是必须注意加酶切位点有没有移码突变。还有一种情况是载体本身没有起始密码子的表达载体,这时需要加上的。
2,直接在设计基因两端加酶切序列。这个生工的服务还是可以的,开始合成基因的时候,我没有加起始终止密码子和酶切位点的,打算合成一些带酶切位点和起始终止密码子的引物,PCR后切胶回收~生工的孔繁静(Refuse AD,人确实很耐心)提示我是不是加上酶切位点和起始终止密码子,到时候直接提质粒酶切就可以了~~考虑虽然加上十几个碱基贵点,但是后面操作省了很多,值了,如果后面免不了用特异性引物PCR验证,也可以用引物的方式加进去酶切位点序列和起始终止密码子,引物合成有公司一块钱一个碱基,提供4OD的量,哈哈,竞争吧,呵呵。
3,值得提醒的是,合成基因做表达的话,基因序列可以免费到公司做密码子优化设计的。优化后,看看基因内部有没有酶切位点,这个有木有基因合成公司会提醒你的。
4,合成时间,很快,我的10天左右就可以拿到3条基因~
3楼2011-07-31 22:24:08
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