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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】设计引物引入酶切位点，如何保证没有发生阅读框移码？
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】设计引物引入酶切位点，如何保证没有发生阅读框移码？

准备开始做原核异源表达，设计引物引入酶切位点，如何保证没有发生阅读框移码？
有没有什么好的方法检测，谢谢！
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1楼 2011-02-27 12:47:58
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walhp05

金虫 (正式写手)
拿BB
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2楼2011-02-27 13:17:13
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
最爱花诗雨(金币+2): 鼓励热心的虫友 2011-02-28 10:04:18
楼主用的是哪个载体？pet28a还是其他的。。？
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3楼2011-02-27 13:22:17
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by walhp05 at 2011-02-27 13:17:13:
拿BB

是何意思啊》？
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4楼2011-02-27 13:49:48
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-02-27 13:22:17:
楼主用的是哪个载体？pet28a还是其他的。。？

是pET29a，可以指导下吗？
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5楼2011-02-27 13:50:20
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
楼主加入酶切位点后可以翻译一下，特别是用NCOI 酶切位点，容易移码，楼主可以在网上搜一下，有关于这种酶的注意事项！
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6楼2011-02-27 17:53:35
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cxt86

金虫 (小有名气)
★ ★
最爱花诗雨(金币+2): good 2011-02-28 10:04:58
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-02-28 22:00:55
到网上查一下图谱  图谱上有酶切位点，还有碱基对应翻译的氨基酸
使用Nco I、  Sal I 、  Hind III 、Xho I  都容易移位 要好好数一下
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7楼2011-02-27 18:19:56
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sutao1979

木虫 (著名写手)
一般引物设计要根据图谱添加或减少碱基然后额外加上没切位点，没啥好的方法
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8楼2011-02-28 03:10:13
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wuyucool

铁杆木虫 (著名写手)
连接完后测序
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9楼2011-02-28 10:23:57
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翱宇

禁虫 (正式写手)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-02-28 22:00:46
每个载体都有序列图谱的，Taq的翻译的读码框应该能反应在酶切位点上，具体的就是三个相连的碱基，根据酶切位点于ATG的位置，选择添加保护碱基吧，保证ATG落入TAQ的翻译框就行。
当然如果是末端的Taq，则在突变终止密码子后，保证以上的事情！
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10楼2011-02-28 13:00:56
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我爱科学2012

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by sutao1979 at 2011-02-28 03:10:13
一般引物设计要根据图谱添加或减少碱基然后额外加上没切位点，没啥好的方法

请问怎么额外添加碱基？额外碱基会不会使得目的蛋白多几个氨基酸出来，导致表达的蛋白没有活性...  请您指教一下
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11楼2013-12-11 23:15:35
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