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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大侠们，帮我看一下这对引物的酶切位点是什么？
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fit3525

新虫 (初入文坛)

[求助] 大侠们，帮我看一下这对引物的酶切位点是什么？

CGTTTCCCGTTACTCTTCT
GGATTTCGGCCCAGAAACT
我需要做酶切T18载体上，引物是别人设计的，我不知道用什么酶切好？
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1楼2012-09-21 11:33:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
实不相瞒，我还真没在你的引物里找到酶切位点。。。
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有时候，一句话，可以改变未来
2楼2012-09-21 11:40:53
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fit3525

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-21 11:40:53
实不相瞒，我还真没在你的引物里找到酶切位点。。。

您的意思是没有酶切位点吗？
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3楼2012-09-21 11:51:42
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by fit3525 at 2012-09-21 11:51:42
您的意思是没有酶切位点吗？...

是的，么有一个特异性的酶切位点。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

dudusdau
4楼2012-09-21 12:55:56
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-24 10:18:46
fit3525: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-19 21:35:52
直接PCR，产物胶回收后连接T载体就好了。当然如果对保真性要求较高，可以采用高保真酶PCR目的条带，回收目标条带后用普通Taq酶加A尾后连接T载体。
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16楼2012-09-23 21:50:18
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
fit3525: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-12-19 21:35:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by fit3525 at 2012-09-21 11:51:42
您的意思是没有酶切位点吗？...

酶切位点都是回文序列，而楼主提供的引物没有

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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有时候，一句话，可以改变未来
5楼2012-09-21 13:00:39
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dudusdau

木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-21 12:55:56
是的，么有一个特异性的酶切位点。...

那要是做酶切连接到pmd18-t上，怎么连啊？我是小白，请大侠帮我一下！
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6楼2012-09-21 13:04:07
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-21 14:25:33
fit3525: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-19 21:36:01
引用回帖:
6楼: Originally posted by dudusdau at 2012-09-21 13:04:07
那要是做酶切连接到pmd18-t上，怎么连啊？我是小白，请大侠帮我一下！...

pmd18-t载体还是比较小的，不建议你用双酶切的方法去连接。
你可以设计引物将载体PCR出来。
再PCR你的目的基因，再共转化，这样效果比较好。
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10楼2012-09-21 13:14:00
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普通回帖

fit3525

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-21 12:55:56
是的，么有一个特异性的酶切位点。...

那要是做酶切连接到pmd18-t上，怎么连啊？我是小白，请大侠帮我一下！
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7楼2012-09-21 13:07:49
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fit3525

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-21 13:00:39
酶切位点都是回文序列，而楼主提供的引物没有
...

那要是做酶切连接到pmd18-t上，怎么连啊？我是小白，请大侠帮我一下！
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8楼2012-09-21 13:09:42
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fit3525

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-21 11:40:53
实不相瞒，我还真没在你的引物里找到酶切位点。。。

那要是做酶切连接到pmd18-t上，怎么连啊？我是小白，请大侠帮我一下！
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9楼2012-09-21 13:10:02
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