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fit3525

新虫 (初入文坛)

[求助] 大侠们,帮我看一下这对引物的酶切位点是什么?

CGTTTCCCGTTACTCTTCT
GGATTTCGGCCCAGAAACT

我需要做酶切T18载体上,引物是别人设计的,我不知道用什么酶切好?
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
实不相瞒,我还真没在你的引物里找到酶切位点。。。
有时候,一句话,可以改变未来
2楼2012-09-21 11:40:53
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fit3525

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-21 11:40:53
实不相瞒,我还真没在你的引物里找到酶切位点。。。

您的意思是没有酶切位点吗?
3楼2012-09-21 11:51:42
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by fit3525 at 2012-09-21 11:51:42
您的意思是没有酶切位点吗?...

是的,么有一个特异性的酶切位点。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-09-21 12:55:56
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-09-24 10:18:46
fit3525: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-19 21:35:52
直接PCR,产物胶回收后连接T载体就好了。当然如果对保真性要求较高,可以采用高保真酶PCR目的条带,回收目标条带后用普通Taq酶加A尾后连接T载体。
16楼2012-09-23 21:50:18
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
fit3525: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2012-12-19 21:35:38
引用回帖:
3楼: Originally posted by fit3525 at 2012-09-21 11:51:42
您的意思是没有酶切位点吗?...

酶切位点都是回文序列,而楼主提供的引物没有

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
有时候,一句话,可以改变未来
5楼2012-09-21 13:00:39
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dudusdau

木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-21 12:55:56
是的,么有一个特异性的酶切位点。...

那要是做酶切连接到pmd18-t上,怎么连啊?我是小白,请大侠帮我一下!
6楼2012-09-21 13:04:07
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-21 14:25:33
fit3525: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-19 21:36:01
引用回帖:
6楼: Originally posted by dudusdau at 2012-09-21 13:04:07
那要是做酶切连接到pmd18-t上,怎么连啊?我是小白,请大侠帮我一下!...

pmd18-t载体还是比较小的,不建议你用双酶切的方法去连接。
你可以设计引物将载体PCR出来。
再PCR你的目的基因,再共转化,这样效果比较好。
10楼2012-09-21 13:14:00
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普通回帖

fit3525

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-21 12:55:56
是的,么有一个特异性的酶切位点。...

那要是做酶切连接到pmd18-t上,怎么连啊?我是小白,请大侠帮我一下!
7楼2012-09-21 13:07:49
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fit3525

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-21 13:00:39
酶切位点都是回文序列,而楼主提供的引物没有
...

那要是做酶切连接到pmd18-t上,怎么连啊?我是小白,请大侠帮我一下!

8楼2012-09-21 13:09:42
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fit3525

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ysn5048 at 2012-09-21 11:40:53
实不相瞒,我还真没在你的引物里找到酶切位点。。。

那要是做酶切连接到pmd18-t上,怎么连啊?我是小白,请大侠帮我一下!

9楼2012-09-21 13:10:02
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