24小时热门版块排行榜    

查看: 1474  |  回复: 5

kehan777

木虫 (小有名气)

[求助] 引物设计,有关酶切位点

如果目的片段比较长,它包含了载体上MCS (多克隆位点) 所有的酶切位点,而我们想用双酶切的方法来构建载体,这时该怎么设计引物?或者说怎么来解决这个问题?

[ Last edited by kehan777 on 2013-12-7 at 21:11 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验交流

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-08 11:24:37
你楼主这种没有可用酶切位点的情况下,楼主可以尝试:
1. 是否能够找到同尾酶
2. 用现在很火的无缝克隆技术来完成
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-07 21:21:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gan19920717

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-08 11:24:41
有这么奇葩的目的片段?!  首先建议你换个MCS上有更多酶切位点的载体,看看有没有合适的,如果还不行,那就放弃双酶切吧,有TA克隆法试试
3楼2013-12-08 10:41:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lm2570

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
究竟多长,可能所有的载体的酶切位点都包括了?不能换载体?
4楼2013-12-08 11:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kehan777

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-07 21:21:07
你楼主这种没有可用酶切位点的情况下,楼主可以尝试:
1. 是否能够找到同尾酶
2. 用现在很火的无缝克隆技术来完成

请问还有没有其他的解决方法?无缝克隆的载体不是目的载体...
5楼2013-12-08 19:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by kehan777 at 2013-12-08 19:05:49
请问还有没有其他的解决方法?无缝克隆的载体不是目的载体......

建议你详细了解一下无缝克隆技术,我觉得无缝克隆技术肯定能解决你的问题,就是得花钱买试剂盒了

还有你的目的载体里面是否有平末端酶切位点呢,如果有的话,也可以用平末端连接啊,筛选个基因方向即可

[ Last edited by gyesang on 2013-12-8 at 20:31 ]
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-12-08 20:30:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kehan777 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见