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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？
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longyh6411

金虫 (小有名气)

[求助] 载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？

载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？我没别的选择了，只能选挨着的
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1楼 2013-04-23 21:25:47
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回帖置顶 ( 共有1个 )

cory0931

至尊木虫 (文坛精英)

巫山云

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2013-04-26 19:05:16
gyesang: 回帖置顶 2013-04-26 19:05:36
longyh6411: 金币+48, ★有帮助 2013-09-18 16:17:47
on yr re:
质粒的两个酶切位点，紧挨着的话，势必会影响双酶切效果，原因是：
内切酶结合时，一般都是需要微点周围有多余碱基，否则影响结合；
再者，酶切后的粘性末端不余怒重合；
若是连个酶切位点之间有几个碱基的间隔，比如说6个以上，一般是可以的；
至少，也得间隔4个碱基吧；
若是直接没有间隔，目前貌似没有多少成功的文献可循；
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锤之千古
10楼2013-04-26 17:37:15
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普通回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-04-24 20:20:08
这的看具体情况，一般来说，不建议用紧邻的两个酶切位点，可能影响其中一个的酶切效率。但也需要具体情况来分析，如果可能，将你的具体序列发上来，大家帮你分析
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2楼2013-04-23 21:46:31
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-04-23 21:58:19
什么酶切位点？把序列发上来。
做是可以，不过建议酶切后用CIAP处理，以防止里面的单酶切片段自连。
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3楼2013-04-23 21:54:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-24 20:20:22
要根据距离和哪种限制酶的情况而定。有些能切开，有些不行。
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4楼2013-04-24 03:59:14
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jwucn

至尊木虫 (文坛精英)
..........................帮您顶一个...................................
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5楼2013-04-24 07:28:03
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zqxabc

木虫 (小有名气)
★
longyh6411(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-25 18:23:22
可以的，临近的两个酶切位点可以分步酶切，一个一个切，先切一个，然后不跑胶直接加Binding buffer过柱洗脱，回收产物再进行下一个酶切。因分步酶切有损耗，所以质粒的量可以增加以保证回收浓度

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2013-04-24 08:09:44
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
longyh6411(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-25 18:23:35
尽量不要，临近位点可能导致一个酶的结合影响另一个酶的结合，还有就是有些酶需要的结合片段较长，分步酶切后也不一定能够实现
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7楼2013-04-24 08:30:35
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山水88

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。同样期待你更详细的应助指导。 2013-04-25 18:23:47
可以的话把序列放上来大家给你分析吧
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8楼2013-04-24 08:41:22
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...山雨

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这样子不好，酶切的效果好需要一定长度是保护碱基，挨着的位点切不动，分步切的话，buffer不一样，效果也非常一般，建议在引物上加酶切位点，这样就不受载体的限制了。
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9楼2013-04-26 16:49:41
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