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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？
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longyh6411

金虫 (小有名气)

[求助] 载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？

载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？我没别的选择了，只能选挨着的
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1楼 2013-04-23 21:25:47
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...山雨

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这样子不好，酶切的效果好需要一定长度是保护碱基，挨着的位点切不动，分步切的话，buffer不一样，效果也非常一般，建议在引物上加酶切位点，这样就不受载体的限制了。
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9楼2013-04-26 16:49:41
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-04-24 20:20:08
这的看具体情况，一般来说，不建议用紧邻的两个酶切位点，可能影响其中一个的酶切效率。但也需要具体情况来分析，如果可能，将你的具体序列发上来，大家帮你分析
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2楼2013-04-23 21:46:31
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-04-23 21:58:19
什么酶切位点？把序列发上来。
做是可以，不过建议酶切后用CIAP处理，以防止里面的单酶切片段自连。
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3楼2013-04-23 21:54:19
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-24 20:20:22
要根据距离和哪种限制酶的情况而定。有些能切开，有些不行。
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4楼2013-04-24 03:59:14
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