应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物酶切位点问题
241/3返回列表123下一页
查看: 2881  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[交流] 引物酶切位点问题 已有6人参与

大家好，我要做克隆表达，但是设计的引物没有加酶切位点，做TA克隆的话会不会比较麻烦？有没有比较好的方法改进啊？一般克隆载体大家用什么载体啊？还有表达载体大家又用什么呢？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
思路决定出路。。。
1楼 2013-04-01 14:11:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

dulei

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: MolEPI+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-01 22:33:45
myprayer: 2013-04-01 22:34:37
连接到一般的TA载体就行。你看看后来要用什么酶切位点，找一个带有所需酶切位点的TA载体。
你可用全式金的TA载体。pEASY-T1或pEASY-T3都行，上边有很多酶切位点，看看适合不适合下游操作。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-01 15:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

dulei

木虫 (小有名气)
表达载体的话，在大肠杆菌里表达用pET系列的载体。宿主菌用BL21（DE3）。
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-01 15:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加上酶切位点就OK了
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-01 22:02:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Leo_xin

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-03 19:31:23
如果你只为了做TA克隆，菌检送测 得到目的序列 而不要后续操作就没必要引入酶切位点，你PCR产物（Taq酶扩 直接有A）跟pMD18-T直接连便可。
如后需要后续实验的 就得加上酶切位点，可以从原来的引物上加，或者重新设计引物，从你的正确质粒上扩，前面加上酶切位点和保护碱基
赞一下 回复此楼
还有太多地方值得改进。
5楼2013-04-02 01:11:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wchuangqi

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by dulei at 2013-04-01 15:13:14
连接到一般的TA载体就行。你看看后来要用什么酶切位点，找一个带有所需酶切位点的TA载体。
你可用全式金的TA载体。pEASY-T1或pEASY-T3都行，上边有很多酶切位点，看看适合不适合下游操作。

我同意，和我的想法一样，全式金的T载体还是很给力的，并且还赠送感受态，并不知道现在还赠送不。
赞一下 回复此楼
天道酬勤
6楼2013-04-02 01:39:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Leo_xin at 2013-04-02 01:11:36
如果你只为了做TA克隆，菌检送测 得到目的序列 而不要后续操作就没必要引入酶切位点，你PCR产物（Taq酶扩 直接有A）跟pMD18-T直接连便可。
如后需要后续实验的 就得加上酶切位点，可以从原来的引物上加，或者重新设 ...

哦，谢谢你哦~
我第一次搞引物设计，拿去合成了，才知道最好加上酶切位点，我是需要做克隆表达的，那么照你这么说，之前没加酶切位点，做表达的时候再设计引物就好了，就是麻烦一些。
而与克隆载体连接时，只要用TAQ酶加A，与T载体能连上就没有问题，是吗？其实我有点担心TAQ酶加A与克隆载体连接会效率低，而且方向可能会错，你觉得有这可能吗？TAQ酶加A的话，与pMD18-T载体连接效率是不是会高？我师姐以前用pGM-T载体，不过我还在考虑用哪种，我的目的片段分别为1600bp和2000bp左右。。。希望多多指教啦！
赞一下 回复此楼
思路决定出路。。。
7楼2013-04-02 21:03:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dulei at 2013-04-01 15:14:44
表达载体的话，在大肠杆菌里表达用pET系列的载体。宿主菌用BL21（DE3）。

谢谢~
回复此楼
思路决定出路。。。
8楼2013-04-02 21:06:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Leo_xin

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-04-02 21:03:18
哦，谢谢你哦~
我第一次搞引物设计，拿去合成了，才知道最好加上酶切位点，我是需要做克隆表达的，那么照你这么说，之前没加酶切位点，做表达的时候再设计引物就好了，就是麻烦一些。
而与克隆载体连接时，只要用 ...

方向会有  正反向，  但你克隆到载体上，肯定要测序，测序前可以菌检来测试方向，把正方向阳性的送测便可（直接送阳性克隆也是可以的，到时候选取正确的那个克隆就好）  我这边做TA克隆  pMD18连接效率挺高的，不用怕
赞一下 回复此楼
还有太多地方值得改进。
9楼2013-04-03 12:47:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Leo_xin at 2013-04-03 12:47:06
方向会有  正反向，  但你克隆到载体上，肯定要测序，测序前可以菌检来测试方向，把正方向阳性的送测便可（直接送阳性克隆也是可以的，到时候选取正确的那个克隆就好）  我这边做TA克隆  pMD18连接效率挺高的，不用 ...

谢谢您的指导！
回复此楼
思路决定出路。。。
10楼2013-04-05 14:21:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lmcyjxs 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工材料求调剂（有希望2吗？） +3 mysdl 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:53 by JourneyLucky
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 7/350 2026-03-13 17:28 by xujiaoszu
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 纺织、生物、化学、材料相关专业招生了 +4 耶耶业 2026-03-09 7/350 2026-03-12 19:05 by Equinoxhua
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 0856材料与化工353分求调剂 +11 NIFFFfff 2026-03-09 11/550 2026-03-10 18:36 by suyuanhai
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭