【答案】应助回帖

» 猜你喜欢

留学--博士招生已经有16人回复
化学工程，本211，求调剂，ab区不限已经有4人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有282人回复
湖北师范大学招调剂啦已经有7人回复
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂已经有0人回复
天津商业大学生物与医药课题组招生已经有0人回复
生物化工学硕招收调剂已经有0人回复
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生已经有0人回复
317分一志愿江南大学化学工程学硕求调剂已经有6人回复
化工申博已经有3人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

我的测序结果显示多出一个碱基来整个编码序列的碱基数就不是3的倍数了已经有4人回复
测序结果显示多了一个碱基，峰图上正常，请问什么原因？谢谢已经有8人回复
设计的引物错了一个碱基对后续试验影响大吗？已经有6人回复
测序后的DNA序列与预测的有几个碱基不同，怎么办已经有18人回复
设计引物时酶切位点保护碱基的问题已经有8人回复
两个引物只是3‘ 有两个碱基的差异，PCR能否增出特异条带已经有14人回复
【求助/交流】现要设计引物扩增后测序，无各个条件都满足的引物，请问什么条件是最重� 已经有5人回复
【求助/交流】pMD 19-T Simple 载体测序通用引物退度温度已经有5人回复
【求助/交流】测序后发现pcr产物中碱基错配。原因？已经有5人回复
【问题反馈】一对引物扩出来的产物测序后竟然是很多质粒的PCR产物，再怎么区分呢？已经有10人回复
【求助/交流】关于PCR的问题已经有18人回复
【求助/交流】为什么测序之后各个菌落之间总会有碱基的差异？已经有12人回复
测序关于碱基的确定已经有7人回复

给力2011

1楼 2011-12-11 21:24:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖置顶 ( 共有2个 )

panda73

金虫 (小有名气)

MolEPI: 3
应助: 80 (初中生)
金币: 1201.3
散金: 44
红花: 2
帖子: 191
在线: 42.5小时
虫号: 985964
注册: 2010-03-30
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+3): 2011-12-11 23:12:40
西瓜: 回帖置顶 2011-12-12 17:24:16
西瓜(金币+2): Good！除去引物的问题，PCR本身也有一定的概率会出错，所以克隆时尽量用高保真酶。一般就如panda73所言，多挑几个克隆去测序就好。 2011-12-12 17:29:35

利用PCR进行基因扩增和克隆时，经常出现在引物区的突变，原因主要是引物合成质量不高（缺失或插入），多挑几个阳性克隆进行测序，就好了

4楼2011-12-11 22:51:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

中国药人

金虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 631.1
散金: 10
帖子: 120
在线: 22.2小时
虫号: 1126331
注册: 2010-10-19
性别: GG
专业: 基因表达调控与表观遗传学

【答案】应助回帖

★
西瓜: 回帖置顶 2011-12-14 16:08:56
西瓜(金币+1): 鼓励反馈！普通Taq酶的错误率有1/1000，做克隆时最好选用高保真酶，如Pfu酶或者混合酶等。 2011-12-14 16:14:06

引用回帖:

10楼: Originally posted by nestzhao at 2011-12-12 22:41:51:
后来怎么处理的啊？重新选克隆送样测序？？

我选了三个克隆啊，测序另外三个都没有问题，只有一个的引物处的酶酶切位点少了一个碱基，而且这个克隆提的质粒双酶切切出的目的片段电泳图比别的克隆大，所以可以肯定是Taq酶有问题。

有容德乃大，无求品自高。

16楼2011-12-14 00:42:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

普通回帖

匿名

用户注销 (正式写手)

应助: 6 (幼儿园)
贵宾: 0.1
金币: 8755
红花: 2
帖子: 609
在线: 504.4小时
虫号: 0
注册: 2009-05-30
性别: GG
专业: 系统生物学

感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+1): 2011-12-11 22:26:02

本帖仅楼主可见

2楼2011-12-11 22:21:57

已阅申请MolEPI 回复此楼编辑查看我的主页

nestzhao

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2429.7
散金: 34
帖子: 244
在线: 77.4小时
虫号: 906981
注册: 2009-11-19
性别: GG
专业: 生物化学

引用回帖:

楼: Originally posted by mengfei8336 at 2011-12-11 22:21:57:
不明白你的具体意思，如果多出来的碱基是在目的基因外的，那就无妨。你的目的基因多大？有时DNA过长的话在两端会出现一些错误，是正常的。

我这个多出来的碱基是在片段内的，我觉得这个片段大小应该不是问题，我测序是测了多个反应的，然后再拼接的。这个多出来的碱基位于下游引物的位置的中间。测序是双向测通的。

给力2011

3楼2011-12-11 22:25:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2429.7
散金: 34
帖子: 244
在线: 77.4小时
虫号: 906981
注册: 2009-11-19
性别: GG
专业: 生物化学

引用回帖:

楼: Originally posted by panda73 at 2011-12-11 22:51:14:
利用PCR进行基因扩增和克隆时，经常出现在引物区的突变，原因主要是引物合成质量不高（缺失或插入），多挑几个阳性克隆进行测序，就好了

这样的啊。。。那我再去试试

给力2011

5楼2011-12-11 23:12:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lijuanwang

铜虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 442.6
帖子: 277
在线: 78.2小时
虫号: 950088
注册: 2010-01-28
专业: 发育生物学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 有道理！ 2011-12-12 00:37:15
nestzhao(金币+2): 2011-12-12 08:44:05

也有可能是测序的问题，对照测序的峰值图，检查一下测序的效果如何。多测几个更好。

6楼2011-12-11 23:26:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2429.7
散金: 34
帖子: 244
在线: 77.4小时
虫号: 906981
注册: 2009-11-19
性别: GG
专业: 生物化学

西瓜: 峰比较锐利，重叠小，效果就是好的。 2011-12-12 17:24:58

引用回帖:

楼: Originally posted by lijuanwang at 2011-12-11 23:26:26:
也有可能是测序的问题，对照测序的峰值图，检查一下测序的效果如何。多测几个更好。

我不知道怎样才叫测序效果好，但我看过他的峰图，每个峰的分离效果还是不错的，没有重叠什么的

给力2011

7楼2011-12-12 08:45:33

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

中国药人

金虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 631.1
散金: 10
帖子: 120
在线: 22.2小时
虫号: 1126331
注册: 2010-10-19
性别: GG
专业: 基因表达调控与表观遗传学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+1): 2011-12-12 22:41:57

前几天我的克隆也送测序了，挑了四个克隆，有一个在引物处的酶切位点少了一个碱基，其他的测序都正常，这个与taq酶的质量有很大的关系。

有容德乃大，无求品自高。

8楼2011-12-12 19:05:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wx1119

铜虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 484.1
红花: 1
帖子: 282
在线: 39.7小时
虫号: 985054
注册: 2010-03-29
性别: MM
专业: 色谱分析

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+1): 2011-12-12 22:42:34

我的测序结果也遇到过，不过没关系的没有影响！

9楼2011-12-12 19:56:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2429.7
散金: 34
帖子: 244
在线: 77.4小时
虫号: 906981
注册: 2009-11-19
性别: GG
专业: 生物化学

引用回帖:

楼: Originally posted by 中国药人 at 2011-12-12 19:05:08:
前几天我的克隆也送测序了，挑了四个克隆，有一个在引物处的酶切位点少了一个碱基，其他的测序都正常，这个与taq酶的质量有很大的关系。

后来怎么处理的啊？重新选克隆送样测序？？