应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序结果发现，在引物位置多了一位碱基，是什么原因引起的？
171/2返回列表12下一页
查看: 3709  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

nestzhao

木虫 (小有名气)

[求助] 测序结果发现，在引物位置多了一位碱基，是什么原因引起的？

今天收到测序结果，发现在我的目标片段的引物的位置，多了一位碱基。不知道是什么原因引起的？？是测序引起的问题，还是引物本身就有问题？？遇到这种情况该怎么处理呢？请各位指教啊！

测序是克隆后去测序的，直接送的是菌液，测序引物用的是通用引物
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
给力2011
1楼 2011-12-11 21:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+1): 2011-12-11 22:26:02
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2011-12-11 22:21:57
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by mengfei8336 at 2011-12-11 22:21:57:
不明白你的具体意思，如果多出来的碱基是在目的基因外的，那就无妨。你的目的基因多大？有时DNA过长的话在两端会出现一些错误，是正常的。

我这个多出来的碱基是在片段内的，我觉得这个片段大小应该不是问题，我测序是测了多个反应的，然后再拼接的。这个多出来的碱基位于下游引物的位置的中间。测序是双向测通的。
赞一下 回复此楼
给力2011
3楼2011-12-11 22:25:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+3): 2011-12-11 23:12:40
西瓜: 回帖置顶 2011-12-12 17:24:16
西瓜(金币+2): Good！除去引物的问题，PCR本身也有一定的概率会出错，所以克隆时尽量用高保真酶。一般就如panda73所言，多挑几个克隆去测序就好。 2011-12-12 17:29:35
利用PCR进行基因扩增和克隆时，经常出现在引物区的突变，原因主要是引物合成质量不高（缺失或插入），多挑几个阳性克隆进行测序，就好了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-12-11 22:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by panda73 at 2011-12-11 22:51:14:
利用PCR进行基因扩增和克隆时，经常出现在引物区的突变，原因主要是引物合成质量不高（缺失或插入），多挑几个阳性克隆进行测序，就好了

这样的啊。。。那我再去试试
赞一下 回复此楼
给力2011
5楼2011-12-11 23:12:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lijuanwang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 有道理！ 2011-12-12 00:37:15
nestzhao(金币+2): 2011-12-12 08:44:05
也有可能是测序的问题，对照测序的峰值图，检查一下测序的效果如何。多测几个更好。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-12-11 23:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)
西瓜: 峰比较锐利，重叠小，效果就是好的。 2011-12-12 17:24:58
引用回帖:
楼: Originally posted by lijuanwang at 2011-12-11 23:26:26:
也有可能是测序的问题，对照测序的峰值图，检查一下测序的效果如何。多测几个更好。

我不知道怎样才叫测序效果好，但我看过他的峰图，每个峰的分离效果还是不错的，没有重叠什么的
赞一下(1人) 回复此楼
给力2011
7楼2011-12-12 08:45:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

中国药人

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+1): 2011-12-12 22:41:57
前几天我的克隆也送测序了，挑了四个克隆，有一个在引物处的酶切位点少了一个碱基，其他的测序都正常，这个与taq酶的质量有很大的关系。
赞一下 回复此楼
有容德乃大，无求品自高。
8楼2011-12-12 19:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wx1119

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+1): 2011-12-12 22:42:34
我的测序结果也遇到过，不过没关系的没有影响！
赞一下 回复此楼
9楼2011-12-12 19:56:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 中国药人 at 2011-12-12 19:05:08:
前几天我的克隆也送测序了，挑了四个克隆，有一个在引物处的酶切位点少了一个碱基，其他的测序都正常，这个与taq酶的质量有很大的关系。

后来怎么处理的啊？重新选克隆送样测序？？
赞一下 回复此楼
给力2011
10楼2011-12-12 22:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nestzhao 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭