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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序结果发现，在引物位置多了一位碱基，是什么原因引起的？
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nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by wx1119 at 2011-12-12 19:56:20:
我的测序结果也遇到过，不过没关系的没有影响！

没影响？？什么意思？？
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给力2011
11楼2011-12-12 22:42:16
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wx1119

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-13 18:29:37
比对的结果没什么影响，我的样品室长度为1200，之前在华大测的，后来在宝生物测，两个结果在ncbi上比对的结果一样。我的一个建议，你可以再考虑一下。
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12楼2011-12-13 00:26:41
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
nestzhao(金币+1): 2011-12-13 09:16:40
引物区有突变当时是公司合成时导致的了
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13楼2011-12-13 07:36:20
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cloverplm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): Good! 2011-12-14 16:07:47
nestzhao(金币+1): 2011-12-14 22:42:49
引用回帖:
7楼: Originally posted by nestzhao at 2011-12-12 08:45:33:
我不知道怎样才叫测序效果好，但我看过他的峰图，每个峰的分离效果还是不错的，没有重叠什么的

A good sequencing results cover the following traits:
1) The map of sequencing is continuous  
2) All peaks are sharp   
3) The background is very low   
4) No double peak appeared
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净——静——竞——进
14楼2011-12-13 21:22:57
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luckyhongli

金虫 (小有名气)
★ ★
mengfei8336(金币+2): 谢谢您对小木虫的关注~ 2011-12-13 21:41:46
这个问题我也遇到过，测序发现引物中间的序列（限制性内切酶位点的前面）多一个碱基，测序峰无任何问题，那么就只有可能是引物合成有问题，质问引物合成公司，公司陪不是，重新合成，再做，OK。
  所以最好问引物合成公司重新合成。祝好运！
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请相信坚持的力量
15楼2011-12-13 21:34:56
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中国药人

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜: 回帖置顶 2011-12-14 16:08:56
西瓜(金币+1): 鼓励反馈！普通Taq酶的错误率有1/1000，做克隆时最好选用高保真酶，如Pfu酶或者混合酶等。 2011-12-14 16:14:06
引用回帖:
10楼: Originally posted by nestzhao at 2011-12-12 22:41:51:
后来怎么处理的啊？重新选克隆送样测序？？

我选了三个克隆啊，测序另外三个都没有问题，只有一个的引物处的酶酶切位点少了一个碱基，而且这个克隆提的质粒双酶切切出的目的片段电泳图比别的克隆大，所以可以肯定是Taq酶有问题。
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有容德乃大，无求品自高。
16楼2011-12-14 00:42:16
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syn1985

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
测序的时候刚开始的那一段碱基会读不准的
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17楼2011-12-14 17:07:55
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