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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物酶切位点问题
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Leo_xin

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-04-10 09:54:36
你好！照这么说，是不是可以将目的片段连接到与表达载体有相应酶切位点的T载体中？而且要保证T载体的两个酶切位点在表达载体中各只存在一个，且位置不能太远，而且我的目的片段里没有相关的酶切位点，是这样吧？这 ...

酶切位点是各存在一个，但距离到没什么大的关系，只要不影响原载体功能（即不切掉载体元件就好）

保护碱基的设计  好像有个表 可以查询  每个酶切位点不太一样。  你可以自己找找看。

一般来说是可以任意加，  最好保证primer的质量就好
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还有太多地方值得改进。
21楼2013-04-10 12:26:14
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dulei

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by 紫藤玲珑 at 2013-04-09 20:11:49
非常感谢
还有个问题
下图里，加酶切位点后发卡结构的△G是0.2，二聚体是-6.8，但是错配是-40.8，

122.jpg
...

这个错配△G值绝对值太大就不行，这样肯定会P出来错配产物。你这个怎么会3‘端全部错配呢？不加酶切位点的引物也有错配吧？
上边几个都没有问题。
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22楼2013-04-10 13:39:58
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by Leo_xin at 2013-04-10 12:26:14
酶切位点是各存在一个，但距离到没什么大的关系，只要不影响原载体功能（即不切掉载体元件就好）

保护碱基的设计  好像有个表 可以查询  每个酶切位点不太一样。  你可以自己找找看。

一般来说是可以任意加， ...

谢谢。
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思路决定出路。。。
23楼2013-04-10 17:04:22
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qizhixin
24楼2014-02-27 22:34:19
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