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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[交流] 引物酶切位点问题 已有6人参与

大家好,我要做克隆表达,但是设计的引物没有加酶切位点,做TA克隆的话会不会比较麻烦?有没有比较好的方法改进啊?一般克隆载体大家用什么载体啊?还有表达载体大家又用什么呢?
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思路决定出路。。。
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Leo_xin

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-04-10 09:54:36
你好!照这么说,是不是可以将目的片段连接到与表达载体有相应酶切位点的T载体中?而且要保证T载体的两个酶切位点在表达载体中各只存在一个,且位置不能太远,而且我的目的片段里没有相关的酶切位点,是这样吧?这 ...

酶切位点是各存在一个,但距离到没什么大的关系,只要不影响原载体功能(即不切掉载体元件就好)

保护碱基的设计  好像有个表 可以查询  每个酶切位点不太一样。  你可以自己找找看。

一般来说是可以任意加,  最好保证primer的质量就好
还有太多地方值得改进。
21楼2013-04-10 12:26:14
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dulei

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: MolEPI+1, 鼓励应助,分子生物版块,期待你的精彩。 2013-04-01 22:33:45
myprayer: 2013-04-01 22:34:37
连接到一般的TA载体就行。你看看后来要用什么酶切位点,找一个带有所需酶切位点的TA载体。
你可用全式金的TA载体。pEASY-T1或pEASY-T3都行,上边有很多酶切位点,看看适合不适合下游操作。
2楼2013-04-01 15:13:14
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dulei

木虫 (小有名气)

表达载体的话,在大肠杆菌里表达用pET系列的载体。宿主菌用BL21(DE3)。
3楼2013-04-01 15:14:44
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
加上酶切位点就OK了
4楼2013-04-01 22:02:29
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