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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物酶切位点问题
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[交流] 引物酶切位点问题 已有6人参与

大家好，我要做克隆表达，但是设计的引物没有加酶切位点，做TA克隆的话会不会比较麻烦？有没有比较好的方法改进啊？一般克隆载体大家用什么载体啊？还有表达载体大家又用什么呢？
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思路决定出路。。。
1楼 2013-04-01 14:11:45
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加上酶切位点就OK了
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4楼2013-04-01 22:02:29
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dulei

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: MolEPI+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-01 22:33:45
myprayer: 2013-04-01 22:34:37
连接到一般的TA载体就行。你看看后来要用什么酶切位点，找一个带有所需酶切位点的TA载体。
你可用全式金的TA载体。pEASY-T1或pEASY-T3都行，上边有很多酶切位点，看看适合不适合下游操作。
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2楼2013-04-01 15:13:14
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dulei

木虫 (小有名气)
表达载体的话，在大肠杆菌里表达用pET系列的载体。宿主菌用BL21（DE3）。
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3楼2013-04-01 15:14:44
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Leo_xin

金虫 (小有名气)
★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-03 19:31:23
如果你只为了做TA克隆，菌检送测 得到目的序列 而不要后续操作就没必要引入酶切位点，你PCR产物（Taq酶扩 直接有A）跟pMD18-T直接连便可。
如后需要后续实验的 就得加上酶切位点，可以从原来的引物上加，或者重新设计引物，从你的正确质粒上扩，前面加上酶切位点和保护碱基
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还有太多地方值得改进。
5楼2013-04-02 01:11:36
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