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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物酶切位点问题
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[交流] 引物酶切位点问题 已有6人参与

大家好，我要做克隆表达，但是设计的引物没有加酶切位点，做TA克隆的话会不会比较麻烦？有没有比较好的方法改进啊？一般克隆载体大家用什么载体啊？还有表达载体大家又用什么呢？
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思路决定出路。。。
1楼 2013-04-01 14:11:45
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dulei

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
19楼: Originally posted by 紫藤玲珑 at 2013-04-09 20:11:49
非常感谢
还有个问题
下图里，加酶切位点后发卡结构的△G是0.2，二聚体是-6.8，但是错配是-40.8，

122.jpg
...

这个错配△G值绝对值太大就不行，这样肯定会P出来错配产物。你这个怎么会3‘端全部错配呢？不加酶切位点的引物也有错配吧？
上边几个都没有问题。
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22楼2013-04-10 13:39:58
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dulei

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: MolEPI+1, 鼓励应助，分子生物版块，期待你的精彩。 2013-04-01 22:33:45
myprayer: 2013-04-01 22:34:37
连接到一般的TA载体就行。你看看后来要用什么酶切位点，找一个带有所需酶切位点的TA载体。
你可用全式金的TA载体。pEASY-T1或pEASY-T3都行，上边有很多酶切位点，看看适合不适合下游操作。
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2楼2013-04-01 15:13:14
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dulei

木虫 (小有名气)
表达载体的话，在大肠杆菌里表达用pET系列的载体。宿主菌用BL21（DE3）。
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3楼2013-04-01 15:14:44
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
加上酶切位点就OK了
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4楼2013-04-01 22:02:29
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