| 查看: 1918 | 回复: 6 | |||
[求助]
原核表达引物设计的问题
|
|
我要原核表达一个蛋白质,表达载体是PET-32a(+),现有下面几个问题要请教一下: 1. 设计引物的时候需不需要去掉终止子(TAA)和起始子(ATG)? 2. 我用的酶切位点是EcoRI和XhoI,这两个酶切位点前加几个保护碱基合适并且不会造成译码突变? 3. 另外我不打算纯化表达的蛋白,只是做个SDS-PAGE电泳和Western验证下抗体的特异性,所以我表达蛋白时是做个全长ORF的,还是一个肽段序列比较好? 4. 原核表达蛋白的大小应该怎么确定? 各位大侠帮我一下,我身边的人都不做这方面的实验,所以做起来问题很多,望大家帮我一下 |
» 收录本帖的淘帖专辑推荐
【经验-心得】 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
化学工程,本211,求调剂,ab区不限
已经有4人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有138人回复
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物,制药工程,食品专业的调剂生
已经有0人回复
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:
做原核表达引物设计的有关问题
已经有14人回复
原核表达之引物设计求证
已经有11人回复
蛋白激酶原核表达
已经有14人回复
原核表达引物设计的问题
已经有6人回复
含信号肽的序列能否在原核表达系统PET-32a中表达
已经有7人回复
真核生物基因在大肠中表达 问题
已经有4人回复
毕赤酵母扩大培养需要提供大量氧气吗?
已经有5人回复
【求助/交流】原核表达羊基因,cDNA长度约为3kb,基因为一种有活性的酶
已经有15人回复
【求助/交流】引物设计的 序列选择问题
已经有9人回复
【求助/交流】(引物设计)怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达?
已经有9人回复
【专题】引入酶切位点的引物设计问题
已经有11人回复
xj0311
木虫 (小有名气)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2112.1
- 帖子: 119
- 在线: 28.5小时
- 虫号: 1790392
- 注册: 2012-05-02
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
2楼2012-10-29 15:56:52
3楼2012-10-30 10:26:57
xj0311
木虫 (小有名气)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2112.1
- 帖子: 119
- 在线: 28.5小时
- 虫号: 1790392
- 注册: 2012-05-02
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
4楼2012-11-01 09:43:05
5楼2012-11-01 10:42:21
xj0311
木虫 (小有名气)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2112.1
- 帖子: 119
- 在线: 28.5小时
- 虫号: 1790392
- 注册: 2012-05-02
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
6楼2012-11-02 10:13:06
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-02 13:55:36
尚轩舞雪: 金币+8, ★★★★★最佳答案, 谢谢,学习了 2012-11-03 09:11:54
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-02 13:55:36
尚轩舞雪: 金币+8, ★★★★★最佳答案, 谢谢,学习了 2012-11-03 09:11:54
|
pet32a这个载体好像有189个氨基酸,约20KD,pET-32a空载体表达的蛋白序列如下:MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDEIADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFLDANLAGSGSGHMHHHHHHSSGLVPRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTDDDDKAMADIGSEFELRRQACGRTRAPPPPPLRSGC 保护位点碱基数目几个都无所谓,酶切就掉了。 最好表达全长,只是多肽的话,理论上,如果你的抗体不是针对这个表位产生的抗体,那WB就是隐形哦,所以表达蛋白可以稍微大些,抗原表位就多些,得到阳性信号的可能性大些。 |
7楼2012-11-02 11:31:58














回复此楼