应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达引物设计的问题
51/1返回列表
查看: 1873  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

尚轩舞雪

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达引物设计的问题

我要原核表达一个蛋白质，表达载体是PET-32a（+），现有下面几个问题要请教一下：
1. 设计引物的时候需不需要去掉终止子（TAA）和起始子（ATG）？
2. 我用的酶切位点是EcoRI和XhoI，这两个酶切位点前加几个保护碱基合适并且不会造成译码突变?
3.  另外我不打算纯化表达的蛋白，只是做个SDS-PAGE电泳和Western验证下抗体的特异性，所以我表达蛋白时是做个全长ORF的，还是一个肽段序列比较好？
4. 原核表达蛋白的大小应该怎么确定？
  各位大侠帮我一下，我身边的人都不做这方面的实验，所以做起来问题很多，望大家帮我一下
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【经验-心得】

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-10-29 14:33:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xj0311 at 2012-10-29 15:56:52
设计引物不一定要去掉终止子和起始子，这需要看你表达载体的特性，这个载体我没用过不太清楚
一般来说在酶切位点之前加保护碱基不会造成译码突变，因为你酶切的时候都能切掉
一般不建议一个肽段，如果能知道某个肽 ...

就是说，我直接在引物两端加上载体MCS上有的酶切位点（最好是6个三碱基的）。全长引物含起始子和终止子也没关系？
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-30 10:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-29 16:06:08
设计引物不一定要去掉终止子和起始子，这需要看你表达载体的特性，这个载体我没用过不太清楚
一般来说在酶切位点之前加保护碱基不会造成译码突变，因为你酶切的时候都能切掉
一般不建议一个肽段，如果能知道某个肽段是抗原决定簇也可以
蛋白大小=碱基数X110／３
赞一下 回复此楼
2楼2012-10-29 15:56:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是的，酶切位点可以在网上查到，全长含有起始子和终止子有没有关系与你的载体有关
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-01 09:43:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

尚轩舞雪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xj0311 at 2012-11-01 09:43:05
是的，酶切位点可以在网上查到，全长含有起始子和终止子有没有关系与你的载体有关

我要用PET-32a（+）载体，那还要不要在全长中包含起始子和终止子
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-01 10:42:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +9 大米饭！ 2026-03-15 12/600 2026-03-16 21:59 by 大米饭！
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭