| 查看: 1875 | 回复: 6 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
原核表达引物设计的问题
|
|||
|
我要原核表达一个蛋白质，表达载体是PET-32a（+），现有下面几个问题要请教一下： 1. 设计引物的时候需不需要去掉终止子（TAA）和起始子（ATG）？ 2. 我用的酶切位点是EcoRI和XhoI，这两个酶切位点前加几个保护碱基合适并且不会造成译码突变? 3. 另外我不打算纯化表达的蛋白，只是做个SDS-PAGE电泳和Western验证下抗体的特异性，所以我表达蛋白时是做个全长ORF的，还是一个肽段序列比较好？ 4. 原核表达蛋白的大小应该怎么确定？ 各位大侠帮我一下，我身边的人都不做这方面的实验，所以做起来问题很多，望大家帮我一下 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【经验-心得】 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有178人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 做原核表达引物设计的有关问题
已经有14人回复
- 原核表达之引物设计求证
已经有11人回复
- 蛋白激酶原核表达
已经有14人回复
- 原核表达引物设计的问题
已经有6人回复
- 含信号肽的序列能否在原核表达系统PET-32a中表达
已经有7人回复
- 真核生物基因在大肠中表达 问题
已经有4人回复
- 毕赤酵母扩大培养需要提供大量氧气吗？
已经有5人回复
- 【求助/交流】原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶
已经有15人回复
- 【求助/交流】引物设计的 序列选择问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】（引物设计）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达？
已经有9人回复
- 【专题】引入酶切位点的引物设计问题
已经有11人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-02 13:55:36
尚轩舞雪: 金币+8, ★★★★★最佳答案, 谢谢，学习了 2012-11-03 09:11:54
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-11-02 13:55:36
尚轩舞雪: 金币+8, ★★★★★最佳答案, 谢谢，学习了 2012-11-03 09:11:54
|
pet32a这个载体好像有189个氨基酸，约20KD，pET-32a空载体表达的蛋白序列如下：MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDEIADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFLDANLAGSGSGHMHHHHHHSSGLVPRGSGMKETAAAKFERQHMDSPDLGTDDDDKAMADIGSEFELRRQACGRTRAPPPPPLRSGC 保护位点碱基数目几个都无所谓，酶切就掉了。 最好表达全长，只是多肽的话，理论上，如果你的抗体不是针对这个表位产生的抗体，那WB就是隐形哦，所以表达蛋白可以稍微大些，抗原表位就多些，得到阳性信号的可能性大些。 |
7楼2012-11-02 11:31:58
xj0311
木虫 (小有名气)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2112.1
- 帖子: 119
- 在线: 28.5小时
- 虫号: 1790392
- 注册: 2012-05-02
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
2楼2012-10-29 15:56:52
3楼2012-10-30 10:26:57
xj0311
木虫 (小有名气)
- 应助: 42 (小学生)
- 金币: 2112.1
- 帖子: 119
- 在线: 28.5小时
- 虫号: 1790392
- 注册: 2012-05-02
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
4楼2012-11-01 09:43:05
