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lmcyjxs

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[交流] 引物酶切位点问题已有6人参与

大家好，我要做克隆表达，但是设计的引物没有加酶切位点，做TA克隆的话会不会比较麻烦？有没有比较好的方法改进啊？一般克隆载体大家用什么载体啊？还有表达载体大家又用什么呢？

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思路决定出路。。。

1楼 2013-04-01 14:11:45

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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by Leo_xin at 2013-04-02 01:11:36
如果你只为了做TA克隆，菌检送测得到目的序列而不要后续操作就没必要引入酶切位点，你PCR产物（Taq酶扩直接有A）跟pMD18-T直接连便可。
如后需要后续实验的就得加上酶切位点，可以从原来的引物上加，或者重新设 ...

哦，谢谢你哦~
我第一次搞引物设计，拿去合成了，才知道最好加上酶切位点，我是需要做克隆表达的，那么照你这么说，之前没加酶切位点，做表达的时候再设计引物就好了，就是麻烦一些。
而与克隆载体连接时，只要用TAQ酶加A，与T载体能连上就没有问题，是吗？其实我有点担心TAQ酶加A与克隆载体连接会效率低，而且方向可能会错，你觉得有这可能吗？TAQ酶加A的话，与pMD18-T载体连接效率是不是会高？我师姐以前用pGM-T载体，不过我还在考虑用哪种，我的目的片段分别为1600bp和2000bp左右。。。希望多多指教啦！