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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物设计，有关酶切位点
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kehan777

木虫 (小有名气)

[求助] 引物设计，有关酶切位点

如果目的片段比较长，它包含了载体上MCS (多克隆位点) 所有的酶切位点，而我们想用双酶切的方法来构建载体，这时该怎么设计引物？或者说怎么来解决这个问题？

[ Last edited by kehan777 on 2013-12-7 at 21:11 ]
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1楼 2013-12-07 21:06:05
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-08 11:24:37
你楼主这种没有可用酶切位点的情况下，楼主可以尝试：
1. 是否能够找到同尾酶
2. 用现在很火的无缝克隆技术来完成
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2楼2013-12-07 21:21:07
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gan19920717

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-08 11:24:41
有这么奇葩的目的片段？！  首先建议你换个MCS上有更多酶切位点的载体，看看有没有合适的，如果还不行，那就放弃双酶切吧，有TA克隆法试试
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3楼2013-12-08 10:41:31
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lm2570

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
究竟多长，可能所有的载体的酶切位点都包括了？不能换载体？
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4楼2013-12-08 11:00:15
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kehan777

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-07 21:21:07
你楼主这种没有可用酶切位点的情况下，楼主可以尝试：
1. 是否能够找到同尾酶
2. 用现在很火的无缝克隆技术来完成

请问还有没有其他的解决方法？无缝克隆的载体不是目的载体...
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5楼2013-12-08 19:05:49
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by kehan777 at 2013-12-08 19:05:49
请问还有没有其他的解决方法？无缝克隆的载体不是目的载体......

建议你详细了解一下无缝克隆技术，我觉得无缝克隆技术肯定能解决你的问题，就是得花钱买试剂盒了

还有你的目的载体里面是否有平末端酶切位点呢，如果有的话，也可以用平末端连接啊，筛选个基因方向即可

[ Last edited by gyesang on 2013-12-8 at 20:31 ]
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6楼2013-12-08 20:30:07
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