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kehan777

木虫 (小有名气)

[求助] 引物设计,有关酶切位点

如果目的片段比较长,它包含了载体上MCS (多克隆位点) 所有的酶切位点,而我们想用双酶切的方法来构建载体,这时该怎么设计引物?或者说怎么来解决这个问题?

[ Last edited by kehan777 on 2013-12-7 at 21:11 ]
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-08 11:24:37
你楼主这种没有可用酶切位点的情况下,楼主可以尝试:
1. 是否能够找到同尾酶
2. 用现在很火的无缝克隆技术来完成
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-07 21:21:07
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gan19920717

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-08 11:24:41
有这么奇葩的目的片段?!  首先建议你换个MCS上有更多酶切位点的载体,看看有没有合适的,如果还不行,那就放弃双酶切吧,有TA克隆法试试
3楼2013-12-08 10:41:31
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lm2570

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
究竟多长,可能所有的载体的酶切位点都包括了?不能换载体?
4楼2013-12-08 11:00:15
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kehan777

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-07 21:21:07
你楼主这种没有可用酶切位点的情况下,楼主可以尝试:
1. 是否能够找到同尾酶
2. 用现在很火的无缝克隆技术来完成

请问还有没有其他的解决方法?无缝克隆的载体不是目的载体...
5楼2013-12-08 19:05:49
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by kehan777 at 2013-12-08 19:05:49
请问还有没有其他的解决方法?无缝克隆的载体不是目的载体......

建议你详细了解一下无缝克隆技术,我觉得无缝克隆技术肯定能解决你的问题,就是得花钱买试剂盒了

还有你的目的载体里面是否有平末端酶切位点呢,如果有的话,也可以用平末端连接啊,筛选个基因方向即可

[ Last edited by gyesang on 2013-12-8 at 20:31 ]
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-12-08 20:30:07
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