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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】设计引物引入酶切位点,如何保证没有发生阅读框移码?

准备开始做原核异源表达,设计引物引入酶切位点,如何保证没有发生阅读框移码?
有没有什么好的方法检测,谢谢!
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walhp05

金虫 (正式写手)


2楼2011-02-27 13:17:13
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★ ★
最爱花诗雨(金币+2): 鼓励热心的虫友 2011-02-28 10:04:18
楼主用的是哪个载体?pet28a还是其他的。。?
3楼2011-02-27 13:22:17
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by walhp05 at 2011-02-27 13:17:13:
拿BB

是何意思啊》?
4楼2011-02-27 13:49:48
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-02-27 13:22:17:
楼主用的是哪个载体?pet28a还是其他的。。?

是pET29a,可以指导下吗?
5楼2011-02-27 13:50:20
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楼主加入酶切位点后可以翻译一下,特别是用NCOI 酶切位点,容易移码,楼主可以在网上搜一下,有关于这种酶的注意事项!
6楼2011-02-27 17:53:35
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cxt86

金虫 (小有名气)


★ ★
最爱花诗雨(金币+2): good 2011-02-28 10:04:58
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-02-28 22:00:55
到网上查一下图谱  图谱上有酶切位点,还有碱基对应翻译的氨基酸
使用Nco I、  Sal I 、  Hind III 、Xho I  都容易移位 要好好数一下
7楼2011-02-27 18:19:56
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sutao1979

木虫 (著名写手)


一般引物设计要根据图谱添加或减少碱基然后额外加上没切位点,没啥好的方法
8楼2011-02-28 03:10:13
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wuyucool

铁杆木虫 (著名写手)


连接完后测序
9楼2011-02-28 10:23:57
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翱宇

禁虫 (正式写手)


xiaoyu1014126(金币+1): 2011-02-28 22:00:46
每个载体都有序列图谱的,Taq的翻译的读码框应该能反应在酶切位点上,具体的就是三个相连的碱基,根据酶切位点于ATG的位置,选择添加保护碱基吧,保证ATG落入TAQ的翻译框就行。
当然如果是末端的Taq,则在突变终止密码子后,保证以上的事情!
10楼2011-02-28 13:00:56
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我爱科学2012

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by sutao1979 at 2011-02-28 03:10:13
一般引物设计要根据图谱添加或减少碱基然后额外加上没切位点,没啥好的方法

请问怎么额外添加碱基?额外碱基会不会使得目的蛋白多几个氨基酸出来,导致表达的蛋白没有活性...  请您指教一下
11楼2013-12-11 23:15:35
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