24小时热门版块排行榜    

查看: 2044  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

maxwell1988

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于PCR产物的突变 已有4人参与

我是个刚进入分子克隆实验的菜鸟。前段时间刚从外周血细胞中提取了其总RNA,再进行RT-PCR逆转录成cDNA。以该cDNA作为模板,进行常规的PCR。之后就是简单的割胶回收,TA克隆。
   送去测序后,连续几次得到的结果都是在目的基因序列的3'端大概9个碱基处,多了一个同样的一个碱基。
   如果是突变,那么为什么会在同样的地方出现同样的情况?如果是模板的问题,为什么以该模板做的其他PCR产物拿去测序却完全正确?会不会是TA克隆出了什么问题?请高手们多多指教!
回复此楼
perfectpig向前冲!别犹豫!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by maxwell1988 at 2010-12-06 15:27:40:

我猜十有八九就是引物的问题了,测了好几次,都是在引物范围内碱基出了问题!引物公司害人啊,浪费了我一个半月的时间!

有这种可能,我就遇到过一次,是把引物合成错了一个碱基,老悲剧了。但是这种情况发生的概率比较低的。
千万不要因为走的太久,而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
8楼2010-12-06 16:35:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

won7

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-06 12:13:01
不太明白,你怎么确定哪个位置是一个突变,而不是真实的碱基呢?尽管PCR因为酶的问题会有错配,但几次PCR、测序都是相同的话,应该可以确定是真实碱基了,但是如果你是用同样的克隆,测序几次,都相同就没有什么问题,说明测序没有问题。

[ Last edited by won7 on 2010-12-6 at 11:17 ]
2楼2010-12-06 11:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
靠末端那么近,多个克隆又都一样,是不是引物上的突变啊
3楼2010-12-06 12:22:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):热心版版,good 2010-12-06 15:52:11
看一看是不是3短的引物设计本身有没有问题,或者是合成回来的引物有突变?!
千万不要因为走的太久,而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
4楼2010-12-06 13:49:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 05:50 by xxniao123
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 +5 晴天加油 2026-08-26 6/300 2026-08-27 04:49 by littlezl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 02:01 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见