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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
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wazlf

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？

我做的是线粒体16s ，长度大约为600bp，但是PCR后没有目的条带，只有230bp左右的条带，附有图片，请哪位高手指导一下，非常感谢！
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1楼 2011-02-27 13:47:57
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spiderboy

金虫 (正式写手)
★ ★
wazlf(金币+3): 2011-03-01 20:21:34
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-06 15:06:07
那个我测过，不过是1.3KB左右的长度。
同意7楼的。。。我再帮忙整理下：
（遇到这种情况一般先调整温度，再调整体系，再重新设计引物）
1、可以先用梯度PCR做不同退火温度。51确实低。可以每提高3度，一起做。
2、可以用TOUCHDOWN,理由是提高特异性
或者TOUCHUP，理由是你的模板质量差
3、增加模板用量，再另外加些MG2+，有条件的话可以加一些Q BUFFER或DMSO。。不过你才扩600多的，估计用不着，但是可以试试DMSO，便宜。
4、重新设计或合成引物
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8楼2011-03-01 11:38:19
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
wazlf(金币+1): 2011-02-27 15:28:55
dhd997(金币+2): 对了 2011-02-28 10:46:11
引用回帖:
Originally posted by wazlf at 2011-02-27 13:47:57:
我做的是线粒体16s ，长度大约为600bp，但是PCR后没有目的条带，只有230bp左右的条带，附有图片，请哪位高手指导一下，非常感谢！

兄弟，以后有PCR的问题请在下面这个帖子里面问哈。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2897252&fpage=1
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2楼2011-02-27 13:49:42
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-02-27 14:07:04
引用回帖:
Originally posted by wazlf at 2011-02-27 13:47:57:
我做的是线粒体16s ，长度大约为600bp，但是PCR后没有目的条带，只有230bp左右的条带，附有图片，请哪位高手指导一下，非常感谢！

你指的230bp左右的条带是最左边的那个么？

觉得特异性好差啊，用的是通用引物还是你自己设计的呢？

PCR反应体系，条件也列一下吧。

中间那么多亮带是不是引物二聚体呢？
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3楼2011-02-27 13:56:17
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
，不好意思，楼主貌似是位MM，这个头像。。。。。。火影看多了。。
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4楼2011-02-27 14:04:15
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