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义翘神州

银虫 (小有名气)

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[交流] 抗体在肿瘤信号通路机制研究与药物筛选中的具体应用

pi3k/akt/mtor、ras/raf/mek/erk、jak/stat、wnt/β-catenin等信号通路异常，会驱动细胞恶性增殖、凋亡失衡或免疫逃逸，这与肿瘤的发生发展密切相关。阐明这些通路的机制，筛选能干预通路的药物，需要高灵敏、高特异性的工具。
抗体是肿瘤信号通路基础研究和药物开发中广泛应用的工具。抗体可用于通路关键蛋白表达及翻译后修饰、蛋白互作等机制研究，还可用于高通量筛选、可行性评估、伴随诊断标志物筛选等创新药研发的全生命周期。义翘神州提供覆盖多种肿瘤信号通路研究的抗体产品，支持wb、ihc、if、fcm、功能验证及其它应用，为肿瘤免疫机制研究、靶点验证和创新免疫疗法开发提供可靠研究工具。

一、抗体在肿瘤通路机制研究中的应用
01 关键节点蛋白的检测
抗p-akt（ser473）、抗p-erk1/2（thr202/tyr204）、抗p-stat3（tyr705）等抗体，通过免疫印迹、免疫组化、免疫荧光或流式细胞术等免疫学技术，用于定量或定位通路中关键蛋白的表达上调或通路激活状态。elisa可用于定量细胞裂解液、血清或培养上清中的分泌因子和信号分子，如vegf、tgf-β、il-6等，分析旁分泌或自分泌信号在肿瘤微环境中的作用。

磷酸化抗体用于肿瘤细胞系kras通路下游分子的蛋白印迹分析
（源自文献：doi:10.1158/2159-8290.cd-20-0187）

02 解析通路中的蛋白互作网络
肿瘤信号通路是多种蛋白质相互作用和传递信息的过程、免疫共沉淀（co-ip）利用抗体捕获某一蛋白，共沉淀相互作用的蛋白，再结合质谱鉴定进而构建肿瘤信号复合物图谱。如lundby等人开发了一套基于质谱技术检测互作蛋白组学的方法，在肺组织中成功鉴定出超过1000个由egf介导的酪氨酸磷酸化位点，并揭示了egfr致癌突变导致下游磷酸化信号重塑的具体分子机制。
抗体不断被用于新技术，比如邻近连接分析（pla）、生物分子荧光互补（bifc）等以抗体或抗体片段作为分子邻近传感器，用于检测可视化弱或瞬时的蛋白相互作用，解析肿瘤微环境中细胞因子-受体、配体-受体及支架蛋白复合物的动态机制。荧光标记的抗体用于流式细胞术，可在单细胞水平定量检测多个通路的激活状态，比如同时标记p-erk、p-akt抗体，用于区分肿瘤细胞中mapk与pi3k通路的共激活亚群。

抗体用于单细胞流式质谱实验，研究抑制剂对pi3k/mtor通路的抑制情况
（源自文献：doi:10.1158/0008-5472.can-21-2609）

二、抗体在肿瘤信号通路药物筛选中的应用场景
01 高通量筛选与先导化合物评价
抗体广泛用于药物发现早期阶段的高通量（hts）平台构建。传统的elisa、bli、spr等技术不仅用于常规筛选也可发展为高通量体系。基于抗体均相的新一代的htrf、alphalisa等免疫定量技术，可用于大规模检测靶点活性、蛋白磷酸化、信号转导及凋亡标志物等。比如以磷酸化akt或erk抗体为检测试剂的激酶抑制剂筛选平台，能够快速评价候选化合物对通路的抑制效果。高内涵筛选（hcs）平台进一步将抗体标记与自动化成像结合，可在细胞水平同时评估化合物对多种通路标志物的影响，进行多参数药效评价。
02 细胞水平的定量评估
抗体可用于候选药物的细胞药效评价，比如细胞增殖、凋亡、细胞周期及信号通路蛋白变化等。以her2治疗策略为例，可同时检测her2表面表达、受体内吞以及下游p-akt/p-erk水平，判断药物是否实现预期的调控功能。通过抗体检测，适合建立“靶点表达量-药物暴露-通路抑制-细胞杀伤”的机制模型，并评估药物的ec50、ic50等参数。
03 评估通路功能的干预性
抗体还可以直接用作功能干预型试剂。中和抗体阻断配体-受体相互作用，而激动型抗体可激活受体。我们可以用来模拟或拮抗信号通路，验证靶点的功能相关性。如在mapk/erk通路研究中，抗erbb3中和抗体被用于阻断nrg1介导的erbb3/her3激活，完全消除了braf/mek抑制诱导的旁路耐药回路，显著降低联合治疗的ic50值。在jak/stat3通路研究中，抗il-6r或抗il-6抗体可阻断肿瘤微环境中il-6介导的stat3激活。
04 评估体内药效与组织分布
在动物模型中，抗体是药效学和药代动力学评价的重要工具。ihc用于检测靶蛋白的表达与定位，反映药物在体内的靶点调节作用和抗肿瘤活性。荧光或放射性核素标记抗体可用于活体成像，评估候选药物的肿瘤靶向性、生物分布、药代动力学等特征。
义翘神州肿瘤信号通路抗体，助力机制研究与药物开发
从信号通路关键蛋白的分析与翻译后修饰（重点是磷酸化）检测，到蛋白互作、通路激活机制，再到候选药物的高通量筛选和体内效价评估，抗体贯穿肿瘤信号通路研究的多个环节。高质量、高特异性抗体是我们解析肿瘤发生发展机制与靶点验证、筛选的重要工具。
肿瘤信号通路研究具有复杂、多维度的检测要求，义翘神州已开发多条通路研究的抗体产品，涵盖pi3k/akt/mtor、ras/raf/mek/erk、jak/stat、wnt/β-catenin等，并提供经过验证的磷酸化抗体以及经wb、ihc、if、fcm等应用验证的抗体，满足蛋白表达检测、亚细胞定位、蛋白互作及新技术开发的需求。

【参考文献】
1. amodio et al. egfr blockade reverts resistance to kras g12c inhibition in colorectal cancer. cancer discov. 2020. doi:10.1158/2159-8290.cd-20-0187
2. karabacak et al. differential kinase activity across prostate tumor compartments defines sensitivity to target inhibition. cancer res. 2022. doi:10.1158/0008-5472.can-21-2609

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