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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[交流] 自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？

左边的MAKER最大是两2000，紧挨着的条带是P出来的，按MAKER比才100多，模板是1200左右的，那这些条带是什么啊？我只加了0.5ul的引物，二聚的话不会这么大吧。。。。。
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1楼2011-09-10 17:41:30
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-11 08:07:07:
目的条带多大？
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3571297&fpage=1 的4楼！

1200左右
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4楼2011-09-11 09:29:20
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zxd95 at 2011-09-10 22:55:31:
加大模板量，做梯度PCR试试！

那些条带是什么呢？？
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5楼2011-09-11 09:31:51
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-11 09:39:27:
短非特异性扩增产物。

非特异性？？？！！那么亮而且整齐啊
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7楼2011-09-11 09:57:24
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xt123xt at 2011-09-12 12:33:04:
我没见过只有3个条带的marker 也没见过3个条带都这么偏上的跑胶 如果是短片段的话 会跑的比较下（100V 40min DL2000 第六条100bp 见图） 会不会是时间不够 或者marker不好 比如放久了 降解了 后面的条带就看不到了 ...

呵呵，跑的时间是短点，拍的不清楚吧 不是3条带的M。。。。。M应该没问题，所以我也觉得是P不成目的片段，只能P到那么多了。。。。
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11楼2011-09-12 14:55:42
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by xt123xt at 2011-09-12 15:20:30:
那就可能是引物的问题 是用软件设计的么? prime3?

5....引物没问题 之前P出来过，可能是PFU高保真本来就不好P 吧
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13楼2011-09-12 17:01:06
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