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evebobo

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DGGE 胶回收后做PCR没有条带是怎么回事??急!!! 已有17人参与

我的DGGE胶回收后没有条带 能问下有什么问题吗?
胶回收用了两种方法都不行  不知道为什么  大家遇到过这种情况吗?
以前条带没分开的时候回收做PCR有条带 现在分开了却没了   期间换酶了
能是酶的问题吗? 是新的阿  我很疑惑 很郁闷  
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evebobo

铜虫 (小有名气)

还是没有回复  是不是又发错地方了? 还是没人知道??????
郁闷
2楼2010-06-28 15:41:20
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evebobo

铜虫 (小有名气)


amisking(金币+1):淡定! 2010-07-04 12:56:52
谁能告诉我为什么啊 ?!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
3楼2010-06-28 15:46:49
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evebobo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zqp9110 at 2010-06-28 17:10:54:
建议加个阳性对照看看。

谢谢你  我已经定了新的酶 做10个能出一个带  我很郁闷
胶回收用了两种方法  一是切胶后放入离心管中加入12ul双蒸水后碾碎 3000转离心30s 后50度水浴30min 然后12000转离心1min 取上清  用这个做模板PCR

二是直接将切下的胶做为模板
7楼2010-07-01 21:21:44
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evebobo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sunny_tc at 2010-06-28 17:27:22:
楼主可否先说一下是如何回收胶的呢?加水量,放置时间?另外PCR时模板的用量?同意楼上意见,如果怀疑是酶,请增加阳性对照!

能说的详细些吗  我也是菜鸟一只  不好意思
8楼2010-07-01 21:22:38
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evebobo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by hulqi at 2010-06-28 19:44:14:
用MIX吧,这才是王道

MIX是什么? 不好意思  我懂的太少了 见笑了  你具体讲讲吗?
9楼2010-07-01 21:33:46
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evebobo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sunny_tc at 2010-06-28 17:27:22:
楼主可否先说一下是如何回收胶的呢?加水量,放置时间?另外PCR时模板的用量?同意楼上意见,如果怀疑是酶,请增加阳性对照!

回复到6楼了  回复错了  谢谢你!
10楼2010-07-01 21:35:10
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evebobo

铜虫 (小有名气)

我想问问大家能不能不做PCRl了  直接把DGGE胶切下送去测序呢  要是能这样就好了 省的这么麻烦了
11楼2010-07-01 22:01:37
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evebobo

铜虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2):奖励下新虫! 2010-07-04 12:57:18
ding
12楼2010-07-04 12:23:22
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evebobo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by violet.zhou at 2010-07-04 13:37:30:
应该是胶回收操作过程中操作的问题吧

我估计也是胶回收的问题
但是没找出操作哪出问题了
想用胶回收试剂盒 不知道有没有好的丙烯酰胺回收试剂盒呢
14楼2010-07-05 15:07:00
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