应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因
141/2返回列表12下一页
查看: 5999  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wq4125

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因 已有3人参与

已经扩增出目的片段，是不是模板量有问题，50ul体系模板量大概为2.5ug
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-03-12 16:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
wq4125(金币+2):谢谢，上胶图了，准备再试试 2010-03-13 00:07
能上个图看看吗？
有可能跟模板量有关系，稍微多加一点试试，另外引物多加一点，带就亮了，但是可能会有非特异性扩增，退火温度适当降低也会有效

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-12 at 16:53 ]
赞一下 回复此楼
2楼2010-03-12 16:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wq4125

铜虫 (小有名气)
上胶图
前4个为一个产物大概800bp，后4个为一个产物，大概400bp
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-13 00:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-14 00:54
用cDNA聚合酶走的比较慢 建议延长延伸时间
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-13 00:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-13 12:48
模板浓度低，目的序列拷贝数低，可以把片段回收后，再扩
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-13 10:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-13 12:48
同意楼上，模板浓度低
另外有引物带，说明引物的浓度足够了
降低一下退火温度试试
胶的质量好像也一般，marker看起来一般，稍微有点模糊
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-13 10:50:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
我也遇到了这种情况，可能是模板浓度低吧，像这种不亮的带回收是收不到什么东西的，我试过了，要增加模板浓度再扩。还有，可能是你跑电泳时样点少了。
赞一下 回复此楼
不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
7楼2010-03-14 17:27:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mourning

木虫 (正式写手)
这位置是目标条带吗？
愿意很多，也许RNA就质量不高，也许引物设计有问题等等，有阳性对照码？
赞一下 回复此楼
8楼2010-03-14 21:06:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wq4390

新虫 (初入文坛)
模板浓度低，目的序列拷贝数低
赞一下 回复此楼
9楼2010-03-18 19:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)
聚焦没聚好，图模糊
你就按照这个条件直接增加循环数，加上5次左右就够了，有时间的话，加10个循环
赞一下 回复此楼
10楼2010-03-18 19:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wq4125 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭