应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因
141/2返回列表12下一页
查看: 5502  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wq4125

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因 已有3人参与

已经扩增出目的片段，是不是模板量有问题，50ul体系模板量大概为2.5ug
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-03-12 16:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
wq4125(金币+2):谢谢，上胶图了，准备再试试 2010-03-13 00:07
能上个图看看吗？
有可能跟模板量有关系，稍微多加一点试试，另外引物多加一点，带就亮了，但是可能会有非特异性扩增，退火温度适当降低也会有效

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-12 at 16:53 ]
赞一下 回复此楼
2楼2010-03-12 16:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wq4125

铜虫 (小有名气)
上胶图
前4个为一个产物大概800bp，后4个为一个产物，大概400bp
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-13 00:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-14 00:54
用cDNA聚合酶走的比较慢 建议延长延伸时间
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-13 00:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-13 12:48
模板浓度低，目的序列拷贝数低，可以把片段回收后，再扩
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-13 10:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-13 12:48
同意楼上，模板浓度低
另外有引物带，说明引物的浓度足够了
降低一下退火温度试试
胶的质量好像也一般，marker看起来一般，稍微有点模糊
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-13 10:50:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
我也遇到了这种情况，可能是模板浓度低吧，像这种不亮的带回收是收不到什么东西的，我试过了，要增加模板浓度再扩。还有，可能是你跑电泳时样点少了。
赞一下 回复此楼
不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
7楼2010-03-14 17:27:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mourning

木虫 (正式写手)
这位置是目标条带吗？
愿意很多，也许RNA就质量不高，也许引物设计有问题等等，有阳性对照码？
赞一下 回复此楼
8楼2010-03-14 21:06:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wq4390

新虫 (初入文坛)
模板浓度低，目的序列拷贝数低
赞一下 回复此楼
9楼2010-03-18 19:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)
聚焦没聚好，图模糊
你就按照这个条件直接增加循环数，加上5次左右就够了，有时间的话，加10个循环
赞一下 回复此楼
10楼2010-03-18 19:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wq4125 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 3/150 2026-03-15 17:32 by 小物理化学
[考研] 290求调剂 +3 孔志浩 2026-03-12 8/400 2026-03-15 15:30 by 孔志浩
[考研] 材料专硕326求调剂 +4 墨煜姒莘 2026-03-15 4/200 2026-03-15 11:02 by dyw
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 288求调剂 +14 王晓阳- 2026-03-09 19/950 2026-03-14 02:05 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +4 ly3471z 2026-03-13 4/200 2026-03-13 13:00 by JourneyLucky
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭