应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因
141/2返回列表12下一页
查看: 5530  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wq4125

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因 已有3人参与

已经扩增出目的片段，是不是模板量有问题，50ul体系模板量大概为2.5ug
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-03-12 16:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
wq4125(金币+2):谢谢，上胶图了，准备再试试 2010-03-13 00:07
能上个图看看吗？
有可能跟模板量有关系，稍微多加一点试试，另外引物多加一点，带就亮了，但是可能会有非特异性扩增，退火温度适当降低也会有效

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-3-12 at 16:53 ]
赞一下 回复此楼
2楼2010-03-12 16:49:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wq4125

铜虫 (小有名气)
上胶图
前4个为一个产物大概800bp，后4个为一个产物，大概400bp
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-13 00:05:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-14 00:54
用cDNA聚合酶走的比较慢 建议延长延伸时间
赞一下 回复此楼
4楼2010-03-13 00:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-13 12:48
模板浓度低，目的序列拷贝数低，可以把片段回收后，再扩
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-13 10:19:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
wq4125(金币+1): 2010-03-13 12:48
同意楼上，模板浓度低
另外有引物带，说明引物的浓度足够了
降低一下退火温度试试
胶的质量好像也一般，marker看起来一般，稍微有点模糊
赞一下 回复此楼
6楼2010-03-13 10:50:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)
我也遇到了这种情况，可能是模板浓度低吧，像这种不亮的带回收是收不到什么东西的，我试过了，要增加模板浓度再扩。还有，可能是你跑电泳时样点少了。
赞一下 回复此楼
不知道什么是生活了，也不知道生活是什么了
7楼2010-03-14 17:27:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mourning

木虫 (正式写手)
这位置是目标条带吗？
愿意很多，也许RNA就质量不高，也许引物设计有问题等等，有阳性对照码？
赞一下 回复此楼
8楼2010-03-14 21:06:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wq4390

新虫 (初入文坛)
模板浓度低，目的序列拷贝数低
赞一下 回复此楼
9楼2010-03-18 19:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)
聚焦没聚好，图模糊
你就按照这个条件直接增加循环数，加上5次左右就够了，有时间的话，加10个循环
赞一下 回复此楼
10楼2010-03-18 19:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wq4125 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +4 蔡大美女 2026-03-13 4/200 2026-03-18 22:47 by walc
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +5 陌の森林 2026-03-18 5/250 2026-03-18 22:18 by bingxueer79
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 304求调剂 +12 小熊joy 2026-03-14 13/650 2026-03-18 12:34 by Linda Hu
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 26考研求调剂 +6 丶宏Sir 2026-03-13 6/300 2026-03-17 16:13 by 醉在风里
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 10/500 2026-03-17 15:07 by 一鸭鸭哟
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭